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Isolamento e caracterização de transcritos sexo-específicos em peixes utilizando a técnica de DDRT-PCR (differential display reverse transcriptase): modelo inicial para implementação de linha de pesquisa em expressão gênica diferencial

Processo: 03/06761-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Apoio a Jovens Pesquisadores
Vigência: 01 de dezembro de 2003 - 30 de novembro de 2006
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
Pesquisador responsável:Adriane Pinto Wasko
Beneficiário:Adriane Pinto Wasko
Instituição-sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):04/10024-5 - Isolamento e caracterização de transcritos sexo-específicos em Leporinus macrocephalus (Pisces, Characiformes) utilizando a técnica de DDRT-PCR ("diferential display reverse transcriptase .., BP.DR
04/10328-4 - Identificação de marcadores sexo-expecificos em Leporinus macrocephalus (Pisces, Anostomidae) utilizando a técnica de RAPD, BP.IC
04/10911-1 - Identificação de marcadores RAPD sexo-específicos e DNAs satélites em Brycon cephalus (Pisces, Bryconinae): contribuições a caracterização genética da espécie, BP.IC
03/11702-4 - Isolamento e caracterização de transcritos sexo-específicos em peixes utilizando a técnica de DDRT-PCR (Differential Display Reverse Transcriptase): modelo inicial para implementação de linha de pesquisa em expressão gênica diferencial, BP.JP
Assunto(s):Expressão gênica  DNA complementar  Diferenciação sexual (núcleo celular)  Peixes 
Publicação FAPESP:http://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_161_141_141.pdf

Resumo

O Departamento de Morfologia do Instituto de Biociências da UNESP-Botucatu possui diversas linhas de pesquisa nas áreas de biologia celular e molecular, histologia e embriologia que, entre outros, incluem estudos sobre efeitos de substâncias cancerígenas e de drogas, biologia da reprodução e do desenvolvimento, determinação e diferenciação sexual, citogenética, genética evolutiva e molecular, identificação e caracterização de proteínas contráteis e histofisiologia e histopatologia dos aparelhos reprodutores feminino e masculino. Embora várias metodologias sejam utilizadas para o desenvolvimento destes estudos, tecnologias de expressão gênica diferencial ainda não são aplicadas e mostram-se extremamente importante para sua complementação, fortificação e atualização. Nos últimos anos, diversas metodologias que permitem a identificação de transcritos diferencialmente expressos, ou seja, genes expressos como RNAs mensageiros para síntese de proteínas e que diferem em abundância entre diferentes amostras, vêm sendo descritas. Entre estas, a técnica de 'display' diferencial (DO) representa uma metodologia relativamente simples e de baixo custo que constitui um modelo adequado para a implementação de estudos de expressão gênica diferencial - através de transcrição reversa de RNA utilizando um 'primer' ancorador, seguida de reação em cadeia da polimerase (PCR) do DNA complementar utilizando um 'primer' arbitrário, diferenças de expressão gênica entre amostras distintas podem ser visualizadas através de eletroforese em gel de poliacrilamida. Como objeto inicial de estudos em expressão gênica diferencial utilizando a técnica de 'display' diferencial, a espécie Leporinus macrocephalus, peixe de grande importância econômica para a pesca e para a piscicultura nacional e que apresenta um sistema cromossômico de determinação sexual do tipo ZZ/ZW, foi selecionada para a identificação e caracterização de transcritos sexo-específicos. Os resultados configurarão dados extremamente importantes para a compreensão da origem e evolução dos mecanismos de determinação e diferenciação sexual em peixes e, de uma forma geral, em vertebrados. (AU)

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