In situ zymography and immunolageling in fixed and decalcified craniofacial tissues

• Processo: 09/00910-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2009
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Raquel Fernanda Gerlach
• Beneficiário: Raquel Fernanda Gerlach
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Histologia MMP
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: in situ zymography | Mmp | zymography | histologia

Resumo

Zimografia in situ é uma técnica muito importante que mostra a atividade proteolítica em secções, e permite que pesquisadors observem os sítios específicos de proteólise em tecidos e células. É uma tecnica normalmente realizada em secções em cortes não fixados, e não é ainda rotineiramente utilizada em tecidos calcificados. Neste estudo descrevemos uma técnica que mantem a atividade proteolítica nos cortes fixados e descalcificados obtidos em cortes feitos em parafina em micrótomo convencional e em cortes feitos em criostato. Nós utilizamos hemimandíbulas de ratos adultos, que apresentam matrizes de osso, dentina e esmalte, e o substrato utilizado foi a DQ-Gelatin. A Atividade gelatinolítica foi co-localizada com a MMP-2 utilizando anticorpos fluorescentes. Atividade proteolítica específica foi observada em todos os cortes, compatível com atividade de metalo-proteases, particularmente evidente na dentina e no osso. Além disso a MMP-2 foi co-localizada com a fluorescência verde (da DQ-Gelatin) na dentina. Em conclusão, a técnica apresentada aqui permitirá que a zimografia in situ seja utilizada em reações em cortes fixados, descalcificados e embebidos em parafina e mostramos que cortes em criostato e fixados com PLP são passíveis de utilização para co-localização da atividade gelatinolítica com a marcação com anticorpos. (AU)