Renaturação pela utilização de altas pressões de uma toxina contendo 7 pontes dissulfeto: Bothropstoxin-1 de Bothrops jararacussu Refolding by High Pressure of a Toxin Containing Seven Disulde Bonds: Bothropstoxin-1 from Bothrops jararacussu

• Processo: 11/01333-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias
• Beneficiário: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Bothropstoxina-1
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aggregation | Bothropstoxin-1 | High hydrostatic pressure | Inclusion bodies | refolding | Renaturação de Proteínas

Resumo

A agregação é um sério obstáculo para a recuperação de proteínas heterólogas biologicamente ativas a partir de corpos de inclusão (IBS), produzidos por bactérias recombinantes. E. coli transformadas com um vetor contendo o cDNA para Bothropstoxina-1 (BthTX-1) expressaram o produto recombinante como IBS. A fim de obter a toxina nativa, agregados de proteína insolúvel foram renaturados em alta pressão hidrostática (APH). IBS foram dissociados (2 kbar, 16 h), e os efeitos da concentração de proteína, bem comomudanças na proporção e concentração dos reagentes oxido-redutores, hidrocloreto de guanidina (GdnHCl), e pH do tampão de renaturação, foram analisadas. Um rendimento de 32% (7,6 mg por litro de cultura bacteriana) na renaturação de BthTX-1 nativa foi obtida com as condições ideais de tampão de renaturação (tampão Tris-HCl, pH 7,5, contendo 3 mM de uma relação de 02:03 de GSH / GSSG e um GdnHCl M). A microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostrou que a desagregação de uma parte das partículas de IBS ocorreu pela compressão e que omorfologia do IBS restantes, partículas esféricas, não foi substancialmente alterada. Foi demonstrada atividade citotóxica dose-dependente de BthTX-1 renaturada sob alta pressão em células musculares C2C12. (AU)