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Estudo genotípico e fenotípico de estafilococos coagulase positiva potencialmente enterotoxigênicos e formadores de biofilmes em laticínios produtores de queijo minas frescal

Processo: 11/07192-7
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de setembro de 2011 - 31 de agosto de 2013
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Pesquisador responsável:Ernani Porto
Beneficiário:Ernani Porto
Instituição-sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
Pesq. associados:Carolina Rodrigues da Fonseca ; Nicolle Ferraz de Arruda Padovani
Assunto(s):Alimentos de origem animal  Laticínios  Queijo  Biofilmes  Microbiologia de alimentos  Higiene de alimentos 

Resumo

Considerando-se que as condições de produção de queijos frescos são particularmente favoráveis à ocorrência e à produção de enterotoxinas produzidas por estafilococos e que estes micro-organismos são altamente capazes de formar biofilmes em superfícies inertes e que ainda existem pouquíssimos estudos sobre a ocorrência de biofilmes de estafilococos na cadeia de produção de queijos frescos, tornam-se necessários estudos sobre a rastreabilidade das fontes de contaminação durante a fabricação, bem como a sua habilidade em aderir aos equipamentos de laticínios formando biofilmes e em resistir aos processos sanitizantes. Este projeto visa isolar e identificar diferentes espécies de estafilococos positivos para o teste de coagulase, potencialmente produtores de enterotoxinas e formadores de biofilmes em laticínios do estado de São Paulo, desde a qualidade do leite recebido até o produto final. Em três laticínios produtores de queijo Minas Frescal, serão realizadas coletas mensais de amostras durante 6 meses em diversos pontos do processo de fabricação. As cepas isoladas que apresentarem resultado positivo ao teste de coagulase serão identificadas genotipicamente em relação à espécie (S. aureus, S. hyicus e S. intermedius) e em relação à presença de genes (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, sej) relacionados à produção de enterotoxinas estafilocócicas A, B, C, D, E, G, H, I e J através de análises de reação da polimerase em cadeia (PCR). As cepas confirmadas como sendo destas 3 espécies também serão identificadas em relação à presença dos genes icaA e icaD, os quais indicam a capacidade da cepa em formar biofilmes. A tipagem das cepas será realizada através da comparação de bandas pela técnica Enterobacteria Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR). Amostras de leite cru, leite pasteurizado e queijos produzidos nos laticínios e dos isolados de Staphylococcus spp. coagulase positiva que apresentarem ao menos algum dos genes relacionados à produção de toxinas clássicas (A, B, C, D e E) serão submetidos a um teste de detecção de enterotoxinas pelo sistema VIDAS® Staph Enterotoxin (SET2). A formação de biofilmes de diferentes cepas em cupons de aço inoxidável será analisada através de microscopia eletrônica de varredura. Cepas escolhidas em função da capacidade de formação de biofilmes serão testadas em processo simulado de higienização, através do uso de agentes de limpeza (detergentes alcalino e ácido) e sanificação (hipoclorito de sódio) utilizados em laticínios. Os dados obtidos para a identificação molecular das cepas serão submetidos ao teste qui-quadrado. Através da comparação do padrão de bandas nas análises de tipagem, os perfis encontrados de cepas de Staphylococcus spp. serão graficamente demonstrados por um dendrograma. Para os ensaios de formação de biofilmes, as diferenças no número de bactérias em cada etapa de limpeza e higienziação serão analisadas estatisticamente pelo Teste t-LSD, adotando-se a=0,05. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
PRADO MARTIN, JOSE GUILHERME; DE OLIVEIRA E SILVA, GABRIELA; DA FONSECA, CAROLINA RODRIGUES; MORALES, CAIO BAPTISTA; PAMPLONA SILVA, CAROLINE SOUZA; MIQUELLUTI, DANIEL LIMA; PORTO, ERNANI. Efficiency of a cleaning protocol for the removal of enterotoxigenic Staphylococcus aureus strains in dairy plants. International Journal of Food Microbiology, v. 238, p. 295-301, DEC 5 2016. Citações Web of Science: 8.

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