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Estudo da dinâmica quantitativa de transcrição de gene heterólogo em células animais transfectadas para otimização de bioprocesso

Resumo

A RT-PCR quantitativa (qRT-PCR) é uma importante ferramenta de quantificação gênica e poucos trabalhos têm enfocado seu uso para estudo, monitoramento e controle da dinâmica quantitativa de transcrição gênica heteróloga em sistemas eucarioticos usados para produção de proteínas recombinantes. A maioria dos trabalhos nesta área utilizam a qRT-PCR simplesmente como método de detecção indireta da expressão gênica. Pretendemos aqui, ao contrário, utilizar a qRT-PCR como ferramenta de estudo de dinâmica de transcrição gênica para desenvolvimento molecular de bioprocesso objetivando melhor produtividade. Este trabalho visa portanto usar a qRT-PCR para estudo molecular da dinâmica cinética da expressão do RNA mensageiro (mRNA) que codifica a glicoproteína do vírus rábico (RVGP), em sistema de expressão em células de Drosophila melanogaster S2 estavelmente transformadas e em sistema de expressão em células BHK-21, infectadas com Semliki Forest Vírus (SFV) recombinante carregando o gene RVGP. O objetivo geral do projeto é usar qRT-PCR em conjunto com ELISA e citometria de fluxo para: 1. estudar de forma cinética a dinâmica de síntese do mRNA em diversas condições de bioprocesso com células transfectadas ou infectadas buscando otimização da síntese da proteína recombinante em diferentes condições metabólicas, e desenvolvendo parâmetros para um bioprocesso com maior e melhor produção; 2. padronização de metodologia original de titulação de partículas virais recombinantes não infecciosas (rSFV) que são importantes candidatas a vacinas virais. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SUAREZ-PATINO, SANDRA FERNANDA; MANCINI, RENATO ASTRAY; PEREIRA, CARLOS AUGUSTO; TORRES SUAZO, CLAUDIO ALBERTO; MENDONCA, RONALDO ZUCATELLI; CALIL JORGE, SORAIA ATTIE. Transient expression of rabies virus glycoprotein (RVGP) in Drosophila melanogaster Schneider 2 (S2) cells. Journal of Biotechnology, v. 192, n. A, p. 255-262, DEC 20 2014. Citações Web of Science: 5.
ASTRAY, R. M.; JORGE, S. A. C.; LEMOS, M. A. N.; YOKOMIZO, A. Y.; BOLDORINI, V. L. L.; PUGLIA, A. L. P.; RIBEIRO, O. G.; PEREIRA, C. A. Kinetic studies of recombinant rabies virus glycoprotein (RVGP) cDNA transcription and mRNA translation in Drosophila melanogaster S2 cell populations. Cytotechnology, v. 65, n. 5, p. 829-838, OCT 2013. Citações Web of Science: 4.

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