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Estudo e desenvolvimento de proteínas de fusão para o transporte intracelular de vetores não virais através de proteínas motoras

Processo: 07/58323-9
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Apoio a Jovens Pesquisadores
Vigência: 01 de julho de 2008 - 30 de junho de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Adriano Rodrigues Azzoni
Beneficiário:Adriano Rodrigues Azzoni
Instituição-sede: Escola Politécnica (EP). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):11/12646-7 - Caracterização de complexos proteína-DNA utilizados como vetores não-virais em estudos de vacinação gênica, BP.IC
09/12635-5 - Desenvolvimento de vetores não-virais para terapia gênica e vacinação por DNA: superação das barreiras à entrega gênica, BP.MS
10/07328-3 - Treinamento técnico em expressão e purificação de proteínas de fusão para aplicação em estudos de terapia gênica, BP.TT
08/55909-5 - Tráfego intracelular de vetores não-virais: desenvolvimento de proteínas de fusão para o transporte de DNA plamidial através da interação com proteínas motoras, BP.MS
08/53876-2 - Estudo e desenvolvimento de proteínas de fusão para o transporte intracelular de vetores não-virais através de proteínas motoras, BP.JP
Assunto(s):Terapia genética  Vacinas de DNA 
Publicação FAPESP:http://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_75_94_94.pdf

Resumo

A baixa eficiência de transferência gênica é um problema recorrente na utilização de vetores não virais em estudos de terapia gênica e vacinação por DNA. Essa limitação provém principalmente da dificuldade de transporte do DNA estrangeiro do exterior para o núcleo das células-alvo, devido à presença de inúmeras barreiras físicas, enzimáticas e difusionais. O principal objetivo do projeto aqui proposto é o desenvolvimento de proteínas recombinantes de fusão capazes de interagir e facilitar o transporte intracelular de vetores plasmídicos (pDNA), explorando-se a capacidade natural de proteínas motoras (como a dineína) para o transporte de cargas da periferia para o interior (centrossoma) de células de mamífero. Proteínas de fusão contendo domínios N-terminais de ligação às dineínas e domínios ou sequências C-terminais de ligação ao DNA (5 a 16 resíduos de aminoácidos básicos) serão primeiramente clonadas e produzidas em E. coli. As interações proteínas de fusão-pDNA serão então avaliadas em ensaios in vitro e por transfecções de células de mamífero em cultura, por meio da quantificação da expressão do gene repórter GFP por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. O tráfego intracelular dos complexos será estudado por hibridização in situ de fluorescência (Fish), avaliando-se a capacidade das proteínas de fusão de facilitar o tráfego intracelular do pDNA por meio de interações com dineínas, além da translocação do pDNA para o núcleo favorecido pela porção C-terminal da proteína. Uma consequência esperada deste projeto é o desenvolvimento de carreadores proteicos capazes de reduzir o gap que diferencia atualmente os vetores não virais dos virais, além de proporcionar melhor compreensão do papel de proteínas motoras como a dineína no tráfego intracelular de transgenes. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ALVES, RAFAEL F.; FAVARO, MARIANNA T. P.; BALBINO, TIAGO A.; DE TOLEDO, MARCELO A. S.; DE LA TORRE, LUCIMARA G.; AZZONI, ADRIANO R. Recombinant protein-based nanocarriers and their association with cationic liposomes: Characterization and in vitro evaluation. COLLOIDS AND SURFACES A-PHYSICOCHEMICAL AND ENGINEERING ASPECTS, v. 513, p. 1-10, JAN 5 2017. Citações Web of Science: 6.
FAVARO, T. P.; DE TOLEDO, M. A. S.; ALVES, R. F.; SANTOS, C. A.; BELOTI, L. L.; JANISSEN, R.; DE LA TORRE, G.; SOUZA, A. P.; AZZONI, A. R. Development of a non-viral gene delivery vector based on the dynein light chain Rp3 and the TAT peptide. Journal of Biotechnology, v. 173, p. 10-18, MAR 10 2014. Citações Web of Science: 10.

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