Absence of Helicobacter pylori high tetracycline resistant 16S rDNA AGA926-928TTC genotype in gastric biopsy specimens from dyspeptic patients of a city in the interior of São Paulo, Brazil

• Processo: 12/11090-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Vigência: 01 de julho de 2012 - 31 de dezembro de 2012
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Marcia Aparecida Speranca
• Beneficiário: Marcia Aparecida Speranca
• Instituição Sede: Centro de Ciências Naturais e Humanas (CCNH). Universidade Federal do ABC (UFABC). Ministério da Educação (Brasil). Santo André , SP, Brasil
• Assunto(s): Técnicas de diagnóstico molecular Helicobacter pylori Gastroenterologia Tetraciclina Resistência microbiana a medicamentos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diagnóstico Molecular | Helicobacter pylori | resistencia a antibióticos | tetraciclina | Gastroenterologia

Resumo

A efetividade do tratamento da bactéria Helicobacter pylori varia regionalmente e está aumentando mundialmente, principalmente como resultado da resistência da bactéria a antibióticos. A tetraciclina é geralmente incluída no regime de tratamento para erradicação de H. pylori, como segunda opção. No Brasil, altos níveis de resistência a tetraciclina (TetR) está associado com três substituições nucleotídicas, AGA926-928TTC, no gene que codifica a fração 16A do rDNA de H. pylori. Como a cultura de H. pylori é fastidiosa, nós investigamos a ocorrência das mutações AGA926-928 do gene que codifica a fração 16S do rRNA da bactéria por análise de ácidos nucléicos a partir do DNA extraído de biópsias gástricas de pacientes dispepticos atendidos no Hospital das Clínicas de Marilia, São Paulo. Biópsias gástricas de 68 pacientes com úlcera péptica e 327 pacientes com gastrite crômica foram investigadas por amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) de um fragmento de 545pb correspondente ao gene que codifica a fração 16S do rRNA de H. pylori e análise do fragmento obtido por restrição com a enzima HinfI. Nesse ensaio, o genótipo contendo as substituições AGA926-928TTC do gene que codifica a fração 16S do rDNA resulta em um padrão de digestão com três fragmentos (281, 227 e 37 bp) e a ausência das substituições resulta em um padrão de dois fragmentos de restrição (264 e 281 bp, devido a um sítio de restrição para a enzima HinfI conservado na sequência correspondente ao fragmento de 545pb do gene que codifica a fração 16S do rRNA de H. pylori. O fragmento de 545pb correspondente a fração 16S do rRNA de H. pylori foi obtido a partir de 90% das biopsias gástricas de pacietnes positivos para H. pylori por histologia. O fragmento de PCR de 545pb correspondente a fração 16S do RNA ribossômico de H. pylori de dois pacientes não apresentou nenhum dos padrões de restrição esperado, indicando ausência do sítio de restrição conservado para HinfI. A análise das sequencias desses dos fragmentos de 545pb por BLASTN desses dois pacientes demonstraram 99% de homologia com a sequencia correspondente da fração 16S do rDNA de H. pylori originário de pacientes da Africa e das Americas do Norte e do Sul. Uma substituição nucleotídica destriiu o sítio conservado de restrição para a enzima HinfI.Concluimos que em nossa população não foi encontrada amostras de H. pylori com as substituições AGA926-928TTC no gene que codifica a fração 16S do rDNA de H. pylori. Outros estudos são necessários para invstigação da ocorrência de um padrão genético diferente que confira resistência a tetraciclina a H. pylori em nossa população e se há relevância biológica nas substituições nucleotídicas encontradas nos fragmentos do gene que codifica a fração 16S de H. pylori das amostras com padrão não esperado de restrição para Hinf I. (AU)