Avaliação da osteogênese e dos perfis transcricionais (RNAm e microRNAs) de células osteoblásticas da calvária e da medula óssea de ratas submetidas à condição de osteoporose

• Processo: 12/17747-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Karina Fittipaldi Bombonato Prado
• Beneficiário: Karina Fittipaldi Bombonato Prado
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Adalberto Luiz Rosa ; Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior ; Márcio Mateus Beloti ; Paulo Tambasco de Oliveira ; Selma Siéssere
• Bolsa(s) vinculada(s): 13/00948-4 - Avaliação da osteogênese de células osteoblásticas da calvária e da medula óssea de ratas induzidas à osteoporose., BP.TT
• Assunto(s): Cultura de células Osteoblastos Osteogênese Células-tronco mesenquimais Expressão gênica MicroRNAs RNA mensageiro Osteoporose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão gênica | microRNA | osteoblastos | osteogênese | osteoporose | ratas | Cultura de Células

Resumo

Atualmente, as células mesenquimais de diversas origens são consideradas fontes para substituição de tecidos. Estas células têm potencial osteogênico e podem ser elegíveis para o reparo e manutenção do tecido ósseo, sendo muito atrativas para a engenharia tecidual. Entretanto, mudanças no seu comportamento podem ser causadas por fatores como a osteoporose, afetando a sua habilidade de auto-renovação e diferenciação. Sendo assim, o objetivo do presente projeto é comparar a expressão gênica de células mesenquimais provenientes da medula óssea diferenciadas em células osteoblásticas com o de células osteoblásticas provenientes da calvária de ratas submetidas à condição de osteoporose. Serão utilizadas 18 ratas Wistar divididas em grupos controle e tratado (indução da osteoporose). As ratas do grupo tratado serão submetidas à ovariectomia bilateral através de protocolo adequado e após 150 dias da cirurgia, as ratas de ambos os grupos serão sacrificadas para coleta dos fêmures e de fragmentos da calvária. Os experimentos serão realizados em triplicata e a partir dos materiais coletados, serão isoladas as células mesenquimais da medula óssea e as células osteoblásticas da calvária e colocadas em garrafas com meio de cultura suplementado (osteogênico) para proliferação e posterior plaqueamento em placas de 24 poços (n=5) para avaliação dos seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total e atividade de fosfatase alcalina (ALP), detecção e quantificação de nódulos mineralizados e análise da expressão de proteínas associadas à osteogênese por meio de imunofluorescência e PCR em tempo real. Além disso, será realizada a avaliação do perfil transcricional (RNAm e microRNAs) e construção de redes gênicas. Os dados dos ensaios bioquímicos serão analisados com o auxílio de programas de estatística para pd0.05 assim como programas de bioinformática especializados serão utilizados para avaliar os dados do perfil transcricional. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SEMEGHINI, MAYARA SGARBI; DE AZEVEDO, FERNANDA GRILO; FERNANDES, ROGER RODRIGO; ASSIS, AMANDA FREIRE; DERNOWSEK, JANAINA ANDREA; ROSA, ADALBERTO LUIZ; SIESSERE, SELMA; PASSOS, GERALDO ALEIXO; BOMBONATO-PRADO, KARINA FITTIPALDI. Menopause transition promotes distinct modulation of mRNAs and miRNAs expression in calvaria and bone marrow osteoblastic cells. Cell Biology International, v. 42, n. 1, p. 12-24, JAN 2018. (12/17747-9, 12/15889-0)