Proteólise intracelular em parasitas da malária: caracterização e inibição de proteases em um novo ensaio para o ‘screening’ de drogas antimaláricas

• Processo: 09/54598-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Marcos Leoni Gazarini Dutra
• Beneficiário: Marcos Leoni Gazarini Dutra
• Instituição Sede: Instituto de Saúde e Sociedade (ISS). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Baixada Santista. Santos , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 13/12913-0 - Cálcio- calmodulina de Plasmodium falciparum: identificação de ligantes e participação na sinalização parasita-hospedeiro, BP.PD; 13/10666-6 - Proteólise e sinalização celular na infecção pelo Plasmodium, BP.TT; 11/15287-8 - Estudo da atividade proteolítica no Plasmodium e modulação do sistema calicreína-cinina em fígados infectados, BP.MS; 10/09264-2 - Participação da fosforilação e homeostase de cálcio na modulação da atividade proteolítica intracelular em Plasmodium chabaudi, BP.IC
• Assunto(s): Plasmodium Proteólise Microscopia de fluorescência Inibidores de proteases Cálcio
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Calcio | Inibidores De Proteases | Microscopia De Fluorescencia | Plasmodium | Proteolise Intracelular | Sinalizacao Celular

Resumo

Neste projeto, pretendo desenvolver e aplicar novas metodologias para o estudo da atividade proteolítica intracelular em parasitas da malária, associada aos mecanismos de sinalização e biologia celular. Essa nova abordagem irá permitir o teste de novas moléculas com atividade antimaláricas em colaboração com pesquisadores de diferentes instituições públicas. Deste modo, teremos novas informações sobre a regulação dessas enzimas (como os estímulos de mobilização por cálcio intracelular), que normalmente é difícil de ser observado nos ensaios convencionais de hidrólise in vitro com as proteases isoladas. A atividade proteolítica dos parasitas pode gerar peptídeos com ações fisiológicas sobre o hospedeiro (ex. peptídeos vasodilatadores/cininas), neste caso estaremos também analisando essa atividade enzimática, na qual pode representar em informações com grande relevância biológica para o entendimento da doença e melhores estratégias para a utilização dos antimaláricos atuais. A metodologia para o estudo de proteases inclui a utilização de peptídeos que apresentam apagamento intramolecular fluorescência, a hidrolise desses substratos pelos parasitas pode ser acompanhada por espectrofluorimetria e microscopia de fluorescência. Como observamos anteriormente que os parasitas da malária são permeáveis a diferentes peptídeos de fluorescência apagada (Farias et al 2005), buscamos aplicar e desenvolver essa abordagem como um ensaio altamente sensível para avaliar ('screening') antimaláricas, e também caracterizar a atividade de diferentes proteases em eventos metabólicos durante o desenvolvimento dos parasitas da malária. (AU)

Publicações científicas

(9)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BUDU, ALEXANDRE; GOMES, MAYRIM M.; MELO, POLLYANA M.; MALUF, SARAH EL CHAMY; BAGNARESI, PIERO; AZEVEDO, MAURO F.; CARMONA, ADRIANA K.; GAZARINI, MARCOS L.. Calmidazolium evokes high calcium fluctuations in Plasmodium falciparum. CELLULAR SIGNALLING, v. 28, n. 3, p. 125-135, MAR 2016. (09/54598-9, 11/14403-4, 13/12913-0, 15/07182-2)

BAGNARESI, PIERO; BARROS, NILANA M. T.; ASSIS, DIEGO M.; MELO, POLLYANA M. S.; FONSECA, RAPHAEL G.; JULIANO, MARIA A.; PESQUERO, JOAO B.; JULIANO, LUIZ; ROSENTHAL, PHILIP J.; CARMONA, ADRIANA K.; et al. Intracellular proteolysis of kininogen by malaria parasites promotes release of active kinins. Malaria Journal, v. 11, MAY 7 2012. (09/54598-9)

MELO, POLLYANA M. S.; MALUF, SARAH EL CHAMY; AZEVEDO, MAURO F.; PASCHOALIN, THAYSA; BUDU, ALEXANDRE; BAGNARESI, PIERO; HENRIQUE-SILVA, FLAVIO; SOARES-COSTA, ANDREA; GAZARINI, MARCOS L.; CARMONA, ADRIANA K.. Inhibition of Plasmodium falciparum cysteine proteases by the sugarcane cystatin CaneCPI-4. Parasitology International, v. 67, n. 2, p. 233-236, APR 2018. (12/50475-2, 15/06861-3, 15/19316-3, 16/15298-3, 11/14403-4, 13/12913-0, 09/54598-9, 09/53840-0)

GOMES SMAUL, MAYRIM MACHADO; BUDU, ALEXANDRE; MONTAGNA, GEORGINA NURI; DA SILVA FERRARA, TAISE FERNANDA; MALUF, SARAH EL CHAMY; BAGNARESI, PIERO; FERREIRA MACHADO, MARCELO MARCONDES; DOS SANTOS, FELLIPE BRONZE; DE AZEVEDO, MAURO FERREIRA; CARMONA, ADRIANA KARAOGLANOVIC; et al. Plasmodium falciparum histidine triad protein and calmodulin modulates calcium homeostasis and intracellular proteolysis. Biochemical and Biophysical Research Communications, v. 503, n. 2, p. 722-728, SEP 5 2018. (12/24278-5, 16/15298-3, 14/07138-0, 16/02412-2, 15/19316-3, 13/12913-0, 09/54598-9, 15/00689-4, 15/11861-2, 15/07182-2, 11/20941-9)

VENTURA, PRISCILLA D. S.; CARVALHO, CAROLINA P. F.; BARROS, NILANA M. T.; MARTINS-SILVA, LEONARDO; DANTAS, EDILSON O.; MARTINEZ, CAROLINA; MELO, POLLYANA M. S.; PESQUERO, JOAO B.; CARMONA, ADRIANA K.; NAGAOKA, MARCIA R.; et al. Malaria infection promotes a selective expression of kinin receptors in murine liver. Malaria Journal, v. 18, JUN 24 2019. (09/54598-9, 08/55928-0, 15/11861-2, 14/22206-2)

GOMES, MAYRIM M.; BUDU, ALEXANDRE; VENTURA, PRISCILLA D. S.; BAGNARESI, PIERO; COTRIN, SIMONE S.; CUNHA, RODRIGO L. O. R.; CARMONA, ADRIANA K.; JULIANO, LUIZ; GAZARINI, MARCOS L.. Specific calpain activity evaluation in Plasmodium parasites. Analytical Biochemistry, v. 468, p. 22-27, JAN 1 2015. (12/50475-2, 10/09264-2, 11/15287-8, 13/12913-0, 09/54598-9, 09/53840-0)

GONZALEZ-BACERIO, JORGE; MALUF, SARAH EL CHAMY; MENDEZ, YANIRA; PASCUAL, ISEL; FLORENT, ISABELLE; MELO, POLLYANA M. S.; BUDU, ALEXANDRE; FERREIRA, JULIANA C.; MORENO, ERNESTO; CARMONA, ADRIANA K.; et al. KBE009: An antimalarial bestatin-like inhibitor of the Plasmodium falciparum M1 aminopeptidase discovered in an Ugi multicomponent reaction-derived peptidomimetic library. Bioorganic & Medicinal Chemistry, v. 25, n. 17, p. 4628-4636, SEP 1 2017. (11/14403-4, 13/12913-0, 09/54598-9)

MENDES, THAIS BIUDE; NOZIMA, BRUNO HEIDI; BUDU, ALEXANDRE; DE SOUZA, RODRIGO BARBOSA; BRAGA CATROXO, MARCIA HELENA; DELCELO, ROSANA; GAZARINI, MARCOS LEONI; CERUTTI, JANETE MARIA. PVALB diminishes [Ca2+] and alters mitochondrial features in follicular thyroid carcinoma cells through AKT/GSK3 beta pathway. Endocrine-Related Cancer, v. 23, n. 9, p. 769-782, SEP 2016. (09/54598-9, 14/06570-6, 13/03867-5)

HOFF, CAROLINA C.; AZEVEDO, MAURO F.; THURLER, ADRIANA B.; MALUF, SARAH EL CHAMY; MELO, POLLYANA M. S.; DEL RIVERO, MADAY ALONSO; GONZALEZ-BACERIO, JORGE; CARMONA, ADRIANA K.; BUDU, ALEXANDRE; GAZARINI, MARCOS L.. Overexpression of Plasmodium falciparum M1 Aminopeptidase Promotes an Increase in Intracellular Proteolysis and Modifies the Asexual Erythrocytic Cycle Development. PATHOGENS, v. 10, n. 11, NOV 2021. (21/12896-5, 09/54598-9, 19/11683-8)