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Estrutura e função de ATPases

Processo: 95/09467-9
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Temático
Vigência: 01 de julho de 1996 - 28 de fevereiro de 2002
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia
Pesquisador responsável:Sergio Verjovski Almeida
Beneficiário:Sergio Verjovski Almeida
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Auxílios(s) vinculado(s):02/02418-8 - Patente para o método de identificação do local de inserção de transposon ou retrovírus no genoma, AP.PAPI
98/00967-7 - Marie Odile Parat Salvado | Pessoa Física (exterior - França) - França, AV.EXT
97/05780-0 - Destabilization of mRNA coding for phosphorylation-site mutants of a rabbit Ca2+ATPase expressed in yeast, AR.EXT
+ mais auxílios vinculados 97/05859-5 - Paulo César de Carvalho ALVES | Univ federal rio janeiro/ufrj - Brasil, AV.BR
96/06812-0 - Heterologous expression of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase, PUB.ART
96/06571-2 - Partial purification and immunohistochemical localization of ATP diphosphohydrolase from S. mansoni, PUB.ART
96/04906-7 - Partial purification of ATP-diphosphohydrolase from Schistosoma mansoni - immunological cross reactivities with potato apyrase and T.gondii nucleoside triphosphate hydrolase, AR.EXT - menos auxílios vinculados
Bolsa(s) vinculada(s):99/07509-7 - Expressão e caracterização de mutantes de triptofanos da Ca2+ATPase de retículo sarcoplasmático, BP.IC
98/15660-4 - Construção e caracterização de minibibliotecas de EST de Schistossoma mansoni geradas com primers híbridos consenso-degenerado, BP.DR
97/14653-1 - Clonagem e caracterização da ATP-difosfohidrolase de Schistosoma mansoni, BP.DR
96/08730-0 - Caracterização por espectroscopia de fluorescência de mutantes de triptofanos em uma Ca+2 ATPase de retículo endoplasmático, BP.DR
Assunto(s):Schistosoma mansoni 

Resumo

Utilizamos a engenharia genética como ferramenta para o estudo da estrutura da Cálcio-ATPase de músculo e sua relação com a função. Estamos obtendo em levedura a expressão do cDNA que codifica a Cálcio-ATPase nativa da membrana do retículo sarcoplasmático de coelho e seus mutantes, que incluem a Cálcio-ATPase com "tag" de hexa-histidina amino-terminal, o que facilita sua purificação. Os domínios hidrofílicos da Cálcio-ATPase são também expressados em bacteria e purificados com sucesso. Medidas espectroscópicasde CD e fluorescência são usadas para estudar a estrutura dos domínios e sua estabilização por ligantes. O objetivo final é entender o mecanismo molecular de conversão de energia deste sistema de transporte iônico. Outra proteína de membrana que estudamos é a ATP-difosfohidrolase (ou apirase) da face externa do tegumento de Schistosoma mansoni, uma nova enzima que identificamos em 1993 e que pertence a uma nova familia de ecto-ATPases que identificamos em 1996. Atualmente estamos a caminho da clonagem da enzima de S. mansoni. O objetivo é caracterizar sua sequência primária e identificar domínios funcionais. No momento postulamos que a enzima pode participar dos mecanismos de escape do parasita, degradando ADPna sua superfície externa. Esta enzima pode ser um alvo para drogas ou vacina; a longo prazo o objetivo do trabalho é estabelecer o papel da enzima na interação parasita-hospedeiro e explorar a sua adequação comoalvo para tratamento de pacientes infectados. (AU)