Citometria de fluxo e fluorimetria em doenças causadas por protozoários

• Processo: 13/04676-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2016
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Heitor Franco de Andrade Junior
• Beneficiário: Heitor Franco de Andrade Junior
• Instituição Sede: Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMT). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: São Paulo
• Pesquisadores associados: Andrés Jimenez Galisteo Jr ; Luciana Regina Meireles Jaguaribe Ekman ; Nanci Do Nascimento
• Bolsa(s) vinculada(s): 14/13978-1 - Citometria de fluxo e fluorimetria em doenças causadas por protozoários., BP.TT; 13/16833-1 - Citometria de fluxo e fluorimetria em doenças causadas por protozoários., BP.TT
• Assunto(s): Leishmaniose Toxoplasmose Citometria de fluxo Fluorometria Técnicas e procedimentos diagnósticos Imunologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citometria de fluxo | Fluorimetria | Imunologia | Leishmaniose | toxoplasmose | Protozoologia parasitária humana

Resumo

Nosso grupo tem estudado as infecções por protozoários e outros agentes, em especial a toxoplasmose, concentrando-se na sua patogenia e diagnóstico. A toxoplasmose afeta cronicamente mais de um bilhão de pessoas no Mundo e em nosso meio tem alta prevalência, com transmissão por contaminação extrínseca de água e alimentos com oocistos de felinos e contaminação intrínseca de carnes de consumo humano. Em geral assintomática esta infecção é uma importante causa de doença congênita, corioretinite com cegueira e encefalite em imunossuprimidos, pelo alto número de infectados. Sua incidência está provavelmente diminuindo, o que vai gerar uma população suscetível adulta em risco de doença congênita. Nosso grupo tem desenvolvido técnicas para seu diagnóstico e acompanhamento tanto da doença humana, quer congênita, ocular ou encefalite, mas também no desenvolvimento de vacinas, em especial a produção de vacinas orais para uso em felinos, interrompendo a rede causal. Estudos com vacinas com taquizoítos irradiados mostraram-se eficientes em camundongos, mas com poucos estudos da resposta celular desejável para os animais protegidos. Há uma grande diferença entre a imunidade protetora da infecção e da controladora da doença, e o esclarecimento destes aspectos é essencial para o desenvolvimento de vacinas. Estes estudos são essências para entender a imunologia no contexto da proteção e sem a necessidade de desafio com a infecção. Os estudos de proliferação celular a antígeno são limitados por incorporação de radiomarcadores, pouco específicos. O diagnóstico usual da infecção é feito pelo achado de anticorpos. A principal ferramenta foi e é a imunoperoxidase e suas variações, que tem a quantificação de anticorpos prejudicada pela sua característica biexponencial. Em anos recentes, temos tido a oportunidade de conhecer novas tecnologias que tem maior eficiência, pelo uso de fluorimetria e citofluorimetria, com bons resultados que resultaram em concessão de equipamentos de detecção multiusuários. A fluorimetria permite a quantificação direta e linear de anticorpos e o uso de citômetro de fluxo permite estudar eficientemente a proliferação de grupos celulares específicos e controle vacinal muito mais adequado. Pretendemos desenvolver métodos sorológicos fluorimétricos para a detecção de classes específicas de anticorpos (IgG, IgM e IgA) contra Toxoplasma gondii em sorotecas estocadas no Laboratório de Protozoologia do IMTSP, com perfil sorológico e clínico definidos, resultando em testes de avidez de IgG e arranjos para ensaios múltiplos fluorimétricos para o uso em gestantes e grupos especiais. Na linha de vacinas, pretendemos identificar os marcadores séricos celulares e humorais que permitam a detecção da eficiência de uma vacina oral para a toxoplasmose em modelos de camundongos usando testes fluorimétricos de marcação múltipla de células e citometria de alta eficiência. Os dois subprojetos detalhados são o exemplo de transformação de tecnologia cientifica que é essencial para a progressão qualitativa e quantitativa de nossos estudos prévios, visando sua utilização posterior em estudos epidemiológicos e vacinais. (AU)

Publicações científicas

(6)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DA COSTA, ANDREA; DE CARVALHO, CAMILA APARECIDA; DO NASCIMENTO, NANCI; DE ANDRADE JR, HEITOR FRANCO. Scavenger receptors mediate increased uptake of irradiated T.gondii extracts by J774 macrophages. International Journal of Radiation Biology, v. 99, n. 10, p. 11-pg., 2023-03-10. (13/04676-9)

FIALHO SAMPAIO, BARBARA CARVALHO; RODRIGUES, JAQUELINE POLIZELI; MEIRELES, LUCIANA REGINA; DE ANDRADE JUNIOR, HEITOR FRANCO. Measles, rubella, mumps and Toxoplasma gondii antibodies in saliva of vaccinated students of schools and universities in Sao Paulo City, Brazil. Brazilian Journal of Infectious Diseases, v. 24, n. 1, p. 51-57, JAN-FEB 2020. (13/04676-9)

ZORGI, NAHIARA ESTEVES; GALISTEO, JR., ANDRES JIMENEZ; SATO, MARIA NOTOMI; DO NASCIMENTO, NANCI; DE ANDRADE, JR., HEITOR FRANCO. Immunity in the spleen and blood of mice immunized with irradiated Toxoplasma gondii tachyzoites. MEDICAL MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, v. 205, n. 4, p. 297-314, AUG 2016. (13/04676-9)

RODRIGUES, J. P.; ANDRADE, JR., H. F.. Efficient duplex solid-phase fluorescent assay (dFISA) for the simultaneous detection of specific anti-T. gondii IgG and IgM due to refined conjugates. JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS, v. 420, p. 11-17, MAY 2015. (13/04676-9)

RODRIGUES, JAQUELINE POLIZELI; DE ANDRADE JUNIOR, HEITOR FRANCO. fficiency of a Single well IgG, IgM and IgA Anti T. gondii Fluorimetric Assay for Pre-natal Screening for Congenital Toxoplasmosi. Journal of Fluorescence, v. 32, n. 2, p. 661-667, MAR 2022. (13/04676-9)

DA COSTA, ANDREA; DE ANDRADE JR, HEITOR FRANCO. Toxoplasma gondii in CD36-/- mice shows lethal infection and poor immunization with probable macrophage immune defects. Parasitology Research, v. N/A, p. 9-pg., 2023-03-29. (13/04676-9, 14/17029-4)