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Development of a one-step Sybr Green i real-time RT-PCR assay for the detection and quantitation of Araraquara and Rio Mamore hantavirus

Processo: 13/19930-8
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
Vigência: 01 de novembro de 2013 - 30 de abril de 2014
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia
Pesquisador responsável:Luiz Tadeu Moraes Figueiredo
Beneficiário:Luiz Tadeu Moraes Figueiredo
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Virologia 

Resumo

Hantavírus são membros da família Bunyaviridae e são uma causa emergente de doenças em todo o mundo, com alta letalidade nas Américas. No Brasil, o diagnóstico de hantavirose é baseado em técnicas imunológicas associadas à RT-PCR convencional. Uma nova etapa SYBR Green em tempo real de RT-PCR foi desenvolvido para a detecção e quantificação de hantavírus Araraquara (ARAV) e hantavírus Rio Mamoré (RIOMV). O limite de detecção do ensaio foi de 10 cópias/mL de RNA transcrito in vitro do segmento de S. A especificidade do ensaio foi avaliada por análise de curva de fusão, o qual mostrou que o vírus produto amplificado ARAV gerado um pico de fusão a 80,83 ± 0,89°C sem gerar dimeros de primers ou de produtos não específicos. O ensaio mostrou ser mais sensível do que a RT-PCR convencional, e foram detectadas duas amostras não detectados por RT-PCR convencional. O SYBR um passo Green-quantitativa em tempo real RT-PCR é específica, sensível e reprodutível, o que o torna uma ferramenta poderosa em ambas as aplicações de diagnóstico e pesquisa geral de ARAV e RIOMV e, possivelmente, outros hantavírus brasileiros. (AU)