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Ligantes enzimáticos: novos modelos de triagem

Processo: 13/01710-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Temático
Vigência: 01 de fevereiro de 2014 - 31 de janeiro de 2018
Área do conhecimento:Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Orgânica
Pesquisador responsável:Quezia Bezerra Cass
Beneficiário:Quezia Bezerra Cass
Instituição-sede: Centro de Ciências Exatas e de Tecnologia (CCET). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
Pesquisadores principais:Carmen Lúcia Cardoso
Pesq. associados:Arthur Henrique Cavalcante de Oliveira ; Dulce Helena Ferreira de Souza ; Emerson Rodrigues de Camargo
Auxílios(s) vinculado(s):14/50299-5 - EMU - espectrômetro de massas modelo Amazon speed com fonte ESI e duplo funil de íons, analisador tipo íon TRAP, AP.EMU
14/50244-6 - UHPLC acoplado a espectrômetro de massa do tipo híbrido com analisador quadrupolar e time of flight, AP.EMU
Bolsa(s) vinculada(s):16/23794-0 - Estereoquímica de substâncias naturais complexas por atividade óptica vibracional: acetogeninas, BP.PD
16/14482-5 - Nanofracionamento por LC-MS/MS e ensaios at-line para a identificação de compostos biativos em extratos de produtos naturais, BE.PQ
16/02873-0 - Acetilcolinesterase e beta-secretase 1: estudo de condições de co-imobilização para triagem de ligantes, BP.DR
+ mais bolsas vinculadas 15/25755-0 - Imobilização e caracterização do reator enzimático de tripsina para aplicação em análise proteômica, BP.IC
14/11640-3 - Métodos LC-MS/2D para triagem de ligantes para a avaliação de atividade inibitória de enzimas e identificação dos compostos ativos em extratos brutos, BP.PD
14/21852-8 - Acetylcholinesterase from Atta Sexdens (leaf-cutter ants): development of a system to expression, purification and functional characterization, BP.PD
14/06907-0 - Imobilização da enzima nucleosídeo difosfato quinase (NDK) de Leishmania major: do estudo de condições à aplicação na triagem de ligantes, BP.DD
13/02054-0 - Enzimas imobilizadas: novos modelos para a triagem de ligantes, BP.PD - menos bolsas vinculadas
Assunto(s):Enzimas imobilizadas  Cromatografia  Ligantes 

Resumo

Como solução ao paradigma de identificar o maior número de compostos ativos em coleções sintéticas e/ou oriundas de extratos naturais, o desenvolvimento de métodos on-line que incorporem identificação e caracterização tem sido explorado. Nesse contexto, o desenvolvimento de novos ensaios de triagem de ligantes de proteínas tem se destacado na procura de hits. Amplamente difundido, o uso de ensaios enzimáticos off-line em solução envolve várias limitações, entre elas a pouca compatibilidade das enzimas com solventes orgânicos. A baixa estabilidade aliada ao alto custo de purificação torna os ensaios on-line utilizando enzimas em solução uma etapa pouco viável para triagem de alta eficiência. Em contrapartida, a realização dos ensaios biológicos on-line, empregando enzimas imobilizadas é uma alternativa valiosa. Os biorreatores ou IMERs (do inglês: Immobilized enzyme reactor) possuem maior estabilidade na presença de solventes orgânicos e variações de temperatura, além de permitir a reutilização e o uso de pequenas quantidades de enzima. Diferentes métodos de imobilização e uma grande variedade de suportes cromatográficos disponíveis ampliam, sobremaneira, as possibilidades de utilização de biorreaotres enzimáticos em estudos on-line, com diferentes formatos e configurações. O uso da cromatografia seletiva de afinidade, utilizando IMERs tem sido explorado com eficiência e demonstrado grandes vantagens como uma das técnicas de triagem de alta eficiência. A cromatografia seletiva de afinidade pode ser explorada através de cromatografia frontal, zonal (linear e não linear). Além disso, a cromatografia zonal pode ser empregada com sistemas 2D hifenadas a diferentes detectores. Enzimas imobilizadas em partículas magnéticas têm sido também eficientemente utilizadas em triagem de ligantes em coleção combinatórias naturais ou sintéticas. O objetivo deste projeto é desenvolver modelos de triagem para os seguintes alvos: ACE, as colinesterases AChE de formiga e humana, e BChE humana, nucleotídeo difosfato quinase (NDK) de Leishmania, NTPDases de T. cruzi e Leishmania e fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK) de T. cruzi e Xantina oxidase (XO). (AU)

Matéria(s) publicada(s) na Agência FAPESP sobre o auxílio:
Cromatografia Líquida: novas tendências e aplicações 
Pós-doutorado em Bioquímica e Biologia Molecular com bolsa da FAPESP 
Pós-doutorado em Cromatografia com Bolsa da FAPESP 
Pós-doutorado em Bioquímica e Biologia Molecular com Bolsa da FAPESP 

Publicações científicas (26)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SEIDL, CLAUDIA; LOPES VILELA, ADRIANA FERREIRA; LIMA, JULIANA MARIA; LEME, GABRIEL MAZZI; CARDOSO, CARMEN LUCIA. A novel on-flow mass spectrometry-based dual enzyme assay. Analytica Chimica Acta, v. 1072, p. 81-86, SEP 23 2019. Citações Web of Science: 0.
AQUINO, AMANDA J.; ALVES, THAYANA DA C.; OLIVEIRA, V, REGINA; FERREIRA, ANTONIO G.; CASS, QUEZIA B. Chemical secondary metabolite profiling of Bauhinia longifolia ethanolic leaves extracts. INDUSTRIAL CROPS AND PRODUCTS, v. 132, p. 59-68, JUN 2019. Citações Web of Science: 0.
DE JESUS, RAPHAEL A.; PRADO, VILMA M. J.; PINTO, VANDERSON S.; SILVA, VALDENIZIA R.; SANTOS, LUCIANO S.; NOGUEIRA, PAULO C. L.; NAVICKIENE, SANDRO; PEREIRA-FILHO, EDENIR R.; BLANK, ARIE E.; BEZERRA, DANIEL P.; SOARES, MILENA B. P.; SEIDL, CLAUDIA; CARDOSO, CARMEN L.; MORAES, VALERIA R. S. Application of LC-DAD Metabolic Fingerprinting in Combination with PCA for Evaluation of Seasonality and Extraction Method on the Chemical Composition of Accessions from Lippia alba (Mill.) N. E. Brown and Biological Activities. Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 30, n. 5, p. 978-987, MAY 2019. Citações Web of Science: 0.
CANZI, EDIONE F.; LOPES, BIANCA REBELO; ROBELDO, THAIANE; BORRA, RICARDO; DA SILVA, MARIA FATIMA G. F.; OLIVEIRA, V, REGINA; MAIA, BEATRIZ HELENA N. S.; CASS, QUEZIA B. Prostaglandins E-2 and F-2 alpha levels in human menstrual fluid by online Solid Phase Extraction coupled to Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry (SPE-LC-MS/MS). JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B-ANALYTICAL TECHNOLOGIES IN THE BIOMEDICAL AND LIFE SCIENCES, v. 1109, p. 60-66, MAR 1 2019. Citações Web of Science: 0.
LOPES VILELA, ADRIANA FERREIRA; CARDOSO, CARMEN LUCIA; MATEO, CESAR. An immobilized acetylcholinesterase as test system to screen new inhibitor drugs to treat Alzheimer's disease. SENSORS AND ACTUATORS B-CHEMICAL, v. 278, p. 196-201, JAN 1 2019. Citações Web of Science: 0.
VANZOLINI, KENIA LOURENCO; AINSWORTH, STUART; BRUYNEEL, BEN; HERZIG, VOLKER; SERAUS, MITCHELL G. L.; SOMSEN, GOVERT W.; CASEWELL, NICHOLAS R.; CASS, QUEZIA BEZERRA; KOOL, JEROEN. Rapid ligand fishing for identification of acetylcholinesterase-binding peptides in snake venom reveals new properties of dendrotoxins. Toxicon, v. 152, p. 1-8, SEP 15 2018. Citações Web of Science: 1.
DOS SANTOS, JR., FERNANDO M.; BICALHO, KEYLLA U.; CALISTO, ITALO H.; SCATENA, GABRIEL S.; FERNANDES, JOAO B.; CASS, QUEZIA B.; BATISTA, JR., JOAO M. Scope of the 2(5H)-furanone helicity rule: a combined ECD, VCD, and DFT investigation. ORGANIC & BIOMOLECULAR CHEMISTRY, v. 16, n. 24, p. 4509-4516, JUN 28 2018. Citações Web of Science: 0.
VANZOLINI, K. L.; SPRENGER, R. DA F.; LEME, G. M.; MORAES, V. R. DE S.; VILELA, A. F. L.; CARDOSO, C. L.; CASS, Q. B. Acetylcholinesterase affinity-based screening assay on Lippia gracilis Schauer extracts. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 153, p. 232-237, MAY 10 2018. Citações Web of Science: 0.
CORNELIO, VIVIAN ESTEVAM; DE MORAES, MARCELA CRISTINA; DOMINGUES, VANESSA DE CASSIA; FERNANDES, JOAO BATISTA; DAS GRACAS FERNANDES DA SILVA, MARIA FATIMA; CASS, QUEZIA BEZERRA; VIEIRA, PAULO CEZAR. Cathepsin D immobilized capillary reactors for on-flow screening assays. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 151, p. 252-259, MAR 20 2018. Citações Web of Science: 2.
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RODRIGUES DE MELO, RICARDO; CARLOS ALNOCH, ROBSON; LOPES VILELA, ADRIANA FERREIRA; DE SOUZA, EMANUEL MALTEMPI; KRIEGER, NADIA; RULLER, ROBERTO; SATO, HELIA HARUMI; MATEO, CESAR. New Heterofunctional Supports Based on Glutaraldehyde-Activation: A Tool for Enzyme Immobilization at Neutral pH. Molecules, v. 22, n. 7 JUL 2017. Citações Web of Science: 10.
SCATENA, GABRIEL S.; CASSIANO, NEILA M.; NETTO, CHAQUIP D.; COSTA, PAULO R. R.; CASS, QUEZIA B.; BATISTA, JR., JOAO M. Preparative chiral separation and absolute configuration of the synthetic pterocarpanquinone LQB-118. Chirality, v. 29, n. 5, p. 167-171, MAY 2017. Citações Web of Science: 3.
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ALVIM-, JR., JOEL; LOPES, BIANCA REBELO; CASS, QUEZIA BEZERRA. Simultaneous enantioselective quantification of fluoxetine and norfluoxetine in human milk by direct sample injection using 2-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A, v. 1451, p. 120-126, JUN 17 2016. Citações Web of Science: 6.
ADRIANA F. L. VILELA; BÁRBARA M. FRUGERI; ANDRÉ L. F. SARRIA; RODRIGO O. S. KITAMURA; JOÃO B. FERNANDES; MARIA F. G. F. SILVA; QUEZIA B. CASS; CARMEN L. CARDOSO. Aminonaphthoquinone Mannich Bases Derived from Lawsone and Their Copper( II) Complex Derivatives: Synthesis and Potential Cholinesterase Inhibitors as Identified by On-flow Assay. Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 27, n. 3, p. 534-545, Mar. 2016. Citações Web of Science: 4.
MANTOANI, SUSIMAIRE P.; CHIERRITO, TALITA P. C.; VILELA, ADRIANA F. L.; CARDOSO, CARMEN L.; MARTINEZ, ANA; CARVALHO, IVONE. Novel Triazole-Quinoline Derivatives as Selective Dual Binding Site Acetylcholinesterase Inhibitors. Molecules, v. 21, n. 2 FEB 2016. Citações Web of Science: 14.
RODRIGUES, MARILI V. N.; BARBOSA, ALEXANDRE F.; DA SILVA, JULIA F.; DOS SANTOS, DEBORAH A.; VANZOLINI, KENIA L.; DE MORAES, MARCELA C.; CORREA, ARLENE G.; CASS, QUEZIA B. 9-Benzoyl 9-deazaguanines as potent xanthine oxidase inhibitors. Bioorganic & Medicinal Chemistry, v. 24, n. 2, p. 226-231, JAN 15 2016. Citações Web of Science: 10.
MAGALHAES, LUANA; CAVALCANTE DE OLIVEIRA, ARTHUR HENRIQUE; VASCONCELLOS, RAPHAEL DE SOUZA; MARIOTINI-MOURA, CHRISTIANE; FIRMINO, RAFAELA DE CASSIA; RANGEL FIETTO, JULIANA LOPES; CARDOSO, CARMEN LUCIA. Label-free assay based on immobilized capillary enzyme reactor of Leishmania infantum nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (LicNTPDase-2-ICER-LC/UV). JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B-ANALYTICAL TECHNOLOGIES IN THE BIOMEDICAL AND LIFE SCIENCES, v. 1008, p. 98-107, JAN 1 2016. Citações Web of Science: 2.
CALIL, FELIPE ANTUNES; LIMA, JULIANA MARIA; CAVALCANTE DE OLIVEIRA, ARTHUR HENRIQUE; MARIOTINI-MOURA, CHRISTIANE; RANGEL FIETTO, JULIANA LOPES; CARDOSO, CARMEN LUCIA. Immobilization of NTPDase-1 from Trypanosoma cruzi and Development of an Online Label-Free Assay. JOURNAL OF ANALYTICAL METHODS IN CHEMISTRY, 2016. Citações Web of Science: 1.
DE MORAES, MARCELA CRISTINA; CARDOSO, CARMEN LUCIA; SEIDL, CLAUDIA; MOADDEL, RUIN; CASS, QUEZIA BEZERRA. Targeting Anti-Cancer Active Compounds: Affinity-Based Chromatographic Assays. CURRENT PHARMACEUTICAL DESIGN, v. 22, n. 39, p. 5976-5987, 2016. Citações Web of Science: 9.
LIMA, JULIANA MARIA; VIEIRA, PLINIO SALMAZO; CAVALCANTE DE OLIVEIRA, ARTHUR HENRIQUE; CARDOSO, CARMEN LUCIA. Label-free offline versus online activity methods for nucleoside diphosphate kinase b using high performance liquid chromatography. ANALYST, v. 141, n. 15, p. 4733-4741, 2016. Citações Web of Science: 4.
SPRENGER, R. F.; THOMASI, S. S.; FERREIRA, A. G.; CASS, Q. B.; BATISTA JUNIOR, J. M. Solution-state conformations of natural products from chiroptical spectroscopy: the case of isocorilagin. ORGANIC & BIOMOLECULAR CHEMISTRY, v. 14, n. 13, p. 3369-3375, 2016. Citações Web of Science: 17.
VANZOLINI, KENIA L.; VIEIRA, LUCAS C. C.; CORREA, ARLENE. G.; MOADDEL, RUIN; CASS, QUEZIA B. Acetylcholinesterase immobilized on modified magnetic beads as a tool for screening a compound library. Microchimica Acta, v. 182, n. 13-14, p. 2209-2213, OCT 2015. Citações Web of Science: 8.
RODRIGUES, M. V. N.; CORREA, R. S.; VANZOLINI, K. L.; SANTOS, D. S.; BATISTA, A. A.; CASS, Q. B. Characterization and screening of tight binding inhibitors of xanthine oxidase: an on-flow assay. RSC ADVANCES, v. 5, n. 47, p. 37533-37538, 2015. Citações Web of Science: 6.

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