Resumo
Como solução ao paradigma de identificar o maior número de compostos ativos em coleções sintéticas e/ou oriundas de extratos naturais, o desenvolvimento de métodos on-line que incorporem identificação e caracterização tem sido explorado. Nesse contexto, o desenvolvimento de novos ensaios de triagem de ligantes de proteínas tem se destacado na procura de hits. Amplamente difundido, o uso de ensaios enzimáticos off-line em solução envolve várias limitações, entre elas a pouca compatibilidade das enzimas com solventes orgânicos. A baixa estabilidade aliada ao alto custo de purificação torna os ensaios on-line utilizando enzimas em solução uma etapa pouco viável para triagem de alta eficiência. Em contrapartida, a realização dos ensaios biológicos on-line, empregando enzimas imobilizadas é uma alternativa valiosa. Os biorreatores ou IMERs (do inglês: Immobilized enzyme reactor) possuem maior estabilidade na presença de solventes orgânicos e variações de temperatura, além de permitir a reutilização e o uso de pequenas quantidades de enzima. Diferentes métodos de imobilização e uma grande variedade de suportes cromatográficos disponíveis ampliam, sobremaneira, as possibilidades de utilização de biorreaotres enzimáticos em estudos on-line, com diferentes formatos e configurações. O uso da cromatografia seletiva de afinidade, utilizando IMERs tem sido explorado com eficiência e demonstrado grandes vantagens como uma das técnicas de triagem de alta eficiência. A cromatografia seletiva de afinidade pode ser explorada através de cromatografia frontal, zonal (linear e não linear). Além disso, a cromatografia zonal pode ser empregada com sistemas 2D hifenadas a diferentes detectores. Enzimas imobilizadas em partículas magnéticas têm sido também eficientemente utilizadas em triagem de ligantes em coleção combinatórias naturais ou sintéticas. O objetivo deste projeto é desenvolver modelos de triagem para os seguintes alvos: ACE, as colinesterases AChE de formiga e humana, e BChE humana, nucleotídeo difosfato quinase (NDK) de Leishmania, NTPDases de T. cruzi e Leishmania e fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK) de T. cruzi e Xantina oxidase (XO). (AU)
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