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Padronização da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e Consensus-Degenerate hybrid oligonucleotide primer (CODEHOP) na monitorização da reativação de betaherpesvírus em pacientes transplantados de células progenitoras hematopoéticas (TCPH)

Processo: 12/20905-5
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de fevereiro de 2014 - 31 de janeiro de 2016
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Pesquisador responsável:Sandra Helena Alves Bonon
Beneficiário:Sandra Helena Alves Bonon
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):15/02357-9 - Padronização da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e Consensus-Degenerate hybrid oligonucleotide primer (CODEHOP) na monitorização da reativação de betaherpesvírus em pacientes transplantados de células progenitoras hematopoéticas (TCPH), BP.TT
14/14324-5 - Padronização da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e Consensus-Degenerate hybrid oligonucleotide primer (CODEHOP) na monitorização da reativação de betaherpesvírus em pacientes transplantados de células progenitoras hematopoéticas (TCPH), BP.TT
14/04229-5 - Padronização da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e Consensus-Degenerate hybrid oligonucleotide primer (CODEHOP) na monitorização da reativação de betaherpesvírus em pacientes transplantados de células progenitoras hematopoéticas (TCPH), BP.TT
Assunto(s):Doença enxerto-hospedeiro  Transplante de células-tronco hematopoéticas  Citomegalovirus  Herpesvirus humano 6  Herpesvirus humano 7  Reação em cadeia da polimerase em tempo real  Antigenemia 

Resumo

Os herpesvírus humanos são os maiores causadores de infecções em pacientes transplantados e em pacientes imunodeprimidos em geral. Dentre essas complicações, estão problemas como pneumonia intersticial, gastrites e encefalites. Estudos recentes encontraram altos níveis de HHV-6 associados com aumento da mortalidade e doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) graus II-III e de DECH agudo de pele graus III e IV associados com doença por CMV em transplantados de células progenitoras hematopóéticas. Atualmente, métodos moleculares de detecção e quantificação de agentes infecciosos estão sendo implantados na rotina a fim de minimizar as consequências e evitar possíveis manifestações clínicas desses herpesvírus, propiciando um tratamento precoce com antivirais adequado (terapia preemptiva). A Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real é uma das opções a ser utilizada no monitoramento dos pacientes transplantados. Uma das vantagens desta técnica é a possibilidade de utilização do plasma de pacientes neutropênicos, onde esta situação frequentemente impossibilita a realização das técnicas de antigenemia no sangue total e, como não há kits diagnósticos disponíveis no mercado para esse fim, é necessário o desenvolvimento dessas técnicas "in house" e a CODEHOP PCR (consenso de primers híbridos degenerados). Sendo assim, o principal objetivo do estudo será padronizar e implantar a técnica da PCR em tempo real, "in house" utilizando a tecnologia Taqman e o desenho dos primers será realizado de regiões virais conservadas e especificas, na detecção e quantificação de DNA dos betaherpesvírus estudados (CMVH, HHV-6 e HHV-7). Serão utilizados também, os primers consenso para triagem dos herpesvírus para posterior estimativa da carga viral. A análise da correlação clínico-laboratorial dos resultados obtidos será realizada em relação à mortalidade, reativação do CMV e ocorrência da DECH entre outras variáveis. Serão obtidas semanalmente, amostras de plasma de 60 pacientes TCPH, desde o dia do transplante até o dia +100 após o transplante. Será realizada a técnica da antigenemia para CMVH e ao mesmo tempo, a técnica da q-PCR será desenvolvida e utilizada para detectar e quantificar a carga viral destas amostras. Nestes aspectos, após o projeto finalizado, poderemos utilizar de forma rotineira estas técnicas, que auxiliarão nos cuidados dos pacientes com o diagnóstico destas viroses. (AU)