Desenvolvimento de vetores não-virais de entrega gênica baseados na cadeia leve de Dineína Rp3

• Processo: 13/23780-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de março de 2014 - 29 de fevereiro de 2016
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Adriano Rodrigues Azzoni
• Beneficiário: Adriano Rodrigues Azzoni
• Instituição Sede: Escola Politécnica (EP). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Nanopartículas Vacinas de DNA Terapia genética Técnicas de transferência de genes Transfecção Vetores genéticos Proteínas recombinantes Dineínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Entrega gênica | Nanopartículas | Proteinas recombinantes | terapia genica | transfecção | Vetores de DNA | Entrega Gênica

Resumo

Um dos principais obstáculos à ampla aplicação da terapia gênica e da vacina de DNA é a falta de um vetor ideal de entrega gênica, que seja ao mesmo tempo eficiente e seguro. Embora mais seguros, os vetores não-virais enfrentam uma série de barreiras físicas, enzimáticas e difusionais que limitam a chegada do transgene ao núcleo das células alvo. Dando continuidade ao trabalho desenvolvido em nosso grupo, o principal objetivo deste projeto é desenvolver e avaliar vetores não-virais multifuncionais baseados em proteínas recombinantes, e avaliá-los "in vitro" e também "in vivo". Nossa abordagem utiliza a proteína recombinante Rp3, uma cadeia leve de dineína, visando assim explorar a capacidade natural dos motores moleculares chamados dineínas para transportar cargas da periferia para o interior da célula, através da rede de microtúbulos. A Rp3 recombinante que será utilizada foi fusionada a peptídeos sintéticos, como seqüências de ligação ao DNA, um peptídeo membrano-ativo (TAT), além de uma sequência de histidinas. Com este trabalho, busca-se adquirir uma maior compreensão dos mecanismos envolvidos na entrada na célula e tráfego intracelular destes vetores. Combinando diferentes técnicas como espalhamento de luz, potencial zeta, ensaios de interação e transfecção na presença de drogas, além de microscopia confocal, poderemos correlacionar as propriedades físico-químicas do complexo proteína-pDNA com o tráfego intracelular e eficiência de entrega gênica. A transfecção de diferentes tipos de células de mamíferos nos permitirá avaliar a eficiência dos nossos vetores para realizar entrega gênica "in vitro", e finalmente, poderemos avaliar o potencial do nosso vetor através de ensaios "in vivo" (camundongos) em um modelo de fibrose cística, com os quais realizaremos experimentos de imunohistoquímica e quantificação da expressão do gene repórter. Esperamos, assim, aumentar o conhecimento atualmente disponível sobre o uso de proteínas recombinantes como vetores de entrega gênica. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ALVES, RAFAEL F.; FAVARO, MARIANNA T. P.; BALBINO, TIAGO A.; DE TOLEDO, MARCELO A. S.; DE LA TORRE, LUCIMARA G.; AZZONI, ADRIANO R.. Recombinant protein-based nanocarriers and their association with cationic liposomes: Characterization and in vitro evaluation. COLLOIDS AND SURFACES A-PHYSICOCHEMICAL AND ENGINEERING ASPECTS, v. 513, p. 1-10, JAN 5 2017. (12/23143-9, 07/58323-9, 13/23780-1)

CARDOSO, SARA; PESSOA FILHO, PEDRO DE ALCANTARA; SOUSA, FANI; AZZONI, ADRIANO RODRIGUES. Arginine and di-arginine ligands for plasmid DNA purification using negative chromatography. Separation and Purification Technology, v. 202, p. 281-289, AUG 31 2018. (13/23780-1)

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DE PINHO FAVARO, MARIANNA TEIXEIRA; UNZUETA, UGUTZ; DE CABO, MARTI; VILLAVERDE, ANTONIO; FERRER-MIRALLES, NEUS; AZZONI, ADRIANO RODRIGUES. Intracellular trafficking of a dynein-based nanoparticle designed for gene delivery. European Journal of Pharmaceutical Sciences, v. 112, p. 71-78, JAN 15 2018. (12/18850-8, 13/23780-1)