Estrutura e dinâmica do trocador Na+/Ca2+ de Drosophila melanogaster

• Processo: 13/17883-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de fevereiro de 2014 - 31 de janeiro de 2016
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Roberto Kopke Salinas
• Beneficiário: Roberto Kopke Salinas
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia estrutural Proteínas de membrana transportadoras Proteínas de ligação ao cálcio Trocador de sódio e cálcio Drosophila melanogaster Isótopos de nitrogênio Ressonância magnética nuclear
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Estrutural | Ca2+ | Dinamica de Proteinas | RMN de proteínas | transportadores de membrana | Trocador de Na+ | Biologia Estrutural

Resumo

Trocadores de Na+/Ca2+ (NCX) utilizam o gradiente eletroquímico do Na+ para promover o transporte de Ca2+ para fora da célula. Além de transportar Na+ e Ca2+, os NCX também são regulados por estes íons. Assim, a ligação de Ca2+ aos domínios citoplasmáticos CBD1 (calcium-binding domain 1) e CBD2 (calcium-binding domain 2) ativa o transporte através da membrana. O trocador de Drosophila melanogaster, CALX, possui comportamento anômalo pois é inibido pela ligação de Ca2+ em CBD1; no CALX, o domínio CBD2 não liga Ca2+. O objetivo desta proposta de pesquisa é investigar do ponto de vista estrutural o mecanismo pelo qual a ligação de Ca2+ em CBD1 inibe a atividade do CALX. Para isto, pretende-se utilizar Ressonância Magnética Nuclear (RMN) em solução para estudar a estrutura e a dinâmica de construções contendo os dois domínios, CBD1 e CBD2, na ausência e presença de Ca2+. Até este momento não há informações estruturais detalhadas ou de dinâmica sobre os domínios transmembranares de um trocador de Na+/Ca2+ eucariótico. Pretende-se desenvolver um protocolo para expressão e purificação de construções que correspondem aos dois domínios transmembranares do CALX e às regiões XIP e r-loop. Espera-se obter amostras enriquecidas com 15N e adquirir espectros de correlação 1H-15N para avaliar a adequação das construções para estudos de RMN em solução. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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OLIVEIRA, LUCIANA COUTINHO; SOUZA, DIORGE PAULO; OKA, GABRIEL UMAJI; LIMA, FILIPE DA SILVA; OLIVEIRA, RONALDO JUNIO; FAVARO, DENIZE CRISTINA; WIENK, HANS; BOELENS, ROLF; FARAH, CHUCK SHAKER; SALINAS, ROBERTO KOPKE. VirB7 and VirB9 Interactions Are Required for the Assembly and Antibacterial Activity of a Type IV Secretion System. Structure, v. 24, n. 10, p. 1707-1718, OCT 4 2016. (13/17883-2, 11/07777-5)