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Biophysical and structural characterization of the recombinant human eIF3L

Processo: 14/04134-4
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
Vigência: 01 de abril de 2014 - 30 de setembro de 2014
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Maurício Lacerda Nogueira
Beneficiário:Maurício Lacerda Nogueira
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São José do Rio Preto , SP, Brasil

Resumo

O fator 3 de início de tradução eucariótico, Subunidade L (eIF3L) é uma das subunidades do complexo eIF3 e também uma proteína acessória da enzima Polimerase I. Considerando a importância desta proteína em diversas funções celulares, nós produzimos a proteína eIF3L recombinante em E. coli e realizamos análises espectroscópicas e in vitro para obtermos informações a cerca da sua estrutura e comportamento hidrodinâmico. Ensaios de espalhamento dinâmico de luz mostrou que eIF3L se comporta como um monômero quando não está interagindo com outras moléculas. Experimentos de dicroísmo circular revelaram um espectro típico de proteínas ±-hélice para eIF3L, o que é suportado por análises de sequência e predição de estrutura secundária e modelo 3D in silico. O docking molecular com a subunidade K do complexo eIF3 revelou uma forte interação e foi predito potenciais sítios de interação em eIF3L, indicando que a proteína é capaz de interagir com outras moléculas como mostrado experimentalmente em outros estudos. Além disso, análises bioinformáticas mostraram a existência de 8 sítios de fosforilação e um possível sítio de N-glicosilação na proteína, sugerindo uma regulação por modificações pós-traducionais. A produção da proteína eIF3L in E. coli e a obtenção de informações estruturais obtidas nesse estudo pode ser instrumental para a descoberta de alvos para drogas e para esclarecer os mecanismos moleculares envolvidos no início de tradução eucariótico. (AU)