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Caracterização cinética e molecular da (Na+,K+)-ATPase do tecido branquial do caranguejo Cardisoma guanhumi (Latreille)

Processo: 13/22605-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de julho de 2014 - 30 de junho de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Francisco de Assis Leone
Beneficiário:Francisco de Assis Leone
Instituição-sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Pesq. associados: Carlos Frederico Leite Fontes ; Daniela Pereira Garçon ; Fernando Luis Medina Mantelatto ; John Campbell McNamara ; Marcelo Rodrigues Pinto
Assunto(s):Estresse oxidativo  ATPase trocadora de sódio-potássio  Crustáceos  Cinética 

Resumo

Este projeto é uma continuidade da linha de pesquisa, que vem sendo apoiada pela FAPESP (2013/00976-8; 2013/24252-9; 2010/17534-0; 2010/16115-3; 2010/06395-9; 2006/56435-1; 2006/56759-1; 2003/01233-7) e cujo objetivo é o estudo sistemático das propriedades estruturais e cinéticas da (Na, K)-ATPase do tecido branquial de diferentes espécies de caranguejos e camarões, com o objetivo de se tentar estabelecer um modelo para a adaptação dos crustáceos a ambientes de diferentes salinidades. A manutenção da osmolalidade da hemolinfa dos crustáceos é atribuída à (Na, K)-ATPase e este mecanismo de adaptação sugere que as respostas dos crustáceos envolvem uma rápida ativação do transporte de íons que deve ser primária a qualquer outra resposta fisiológica deste animal. Com relação ao projeto em tela pretende-se investigar a sinalização celular vinculada à regulação da (Na,K)-ATPase de Cardisoma guanhumi bem como suas consequências diretas na captação de NaCl através das brânquias durante a aclimatação a ambientes hiposalinos (abaixo de 300 salinidade) e a ambientes marinhos (cerca de 330 salinidade). Para isso serão realizados os seguintes estudos: 1) preparação da (Na,K)-ATPase do tecido branquial de C. guanhumi. 2) caracterização cinética da atividade da Na,K-ATPase de C. guanhumi em relação aos ligantes ATP, PNPP, sódio, potássio, magnésio, amônio e ouabaína. 3) análise da expressão da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi. 4) localização subcelular da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi através de ensaios imunohistoquímicos. 5) quantificação das atividades das enzimas que participam do estresse oxidativo em animais aclimatados em diferentes condições. 6) Estudo de fosforilação da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi. (fosforilação da enzima em condições adequadas de íons; efeito de poliaminas na estabilidade da fosfoenzima; efeito de poliaminas na desfosforilação da enzima na presença de potássio; análise por western blot do FXYD2 após fosforilação por PKA e PKC; preparação e extração do FXYD2 fosforilado). 7) Regulação da atividade da (Na,K)-ATPase branquial de C. guanhumi. pelo FXYD2 exógeno. 8) Estudo da ação de poliaminas na atividade da (Na,K)-ATPase. 9) Padronização de um protocolo de cultura de células branquiais. 10) Correlacionar o FXYD2 com PKA estimuladas por poliaminas e com a atividade da (Na,K)-ATPase branquial de C. guanhumi em diferentes condições de salinidade usando cultura de células branquiais. 11) análise da atividade da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi aclimatado em diferentes condições (salinidade, amônio, nitrito, metais pesados). (AU)

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FARIAS, DANIEL L.; LUCENA, MALSON N.; GARCON, DANIELA P.; MANTELATTO, FERNANDO L.; MCNAMARA, JOHN C.; LEONE, FRANCISCO A. A Kinetic Characterization of the Gill (Na+, K+)-ATPase from the Semi-terrestrial Mangrove Crab Cardisoma guanhumi Latreille, 1825 (Decapoda, Brachyura). Journal of Membrane Biology, v. 250, n. 5, p. 517-534, OCT 2017. Citações Web of Science: 1.
ANTUNES, CLAUDIA DOI; LUCENA, MALSON NEILSON; GARCON, DANIELA PEREIRA; LEONE, FRANCISCO ASSIS; MCNAMARA, JOHN CAMPBELL. Low salinity-induced alterations in epithelial ultrastructure, Na+/K+-ATPase immunolocalization and enzyme kinetic characteristics in the gills of the thinstripe hermit crab, Clibanarius vittatus (Anomura, Diogenidae). JOURNAL OF EXPERIMENTAL ZOOLOGY PART A-ECOLOGICAL AND INTEGRATIVE PHYSIOLOGY, v. 327, n. 6, p. 380-397, JUL 2017. Citações Web of Science: 2.
LUCENA, MALSON N.; MCNAMARA, JOHN C.; LEONE, FRANCISCO A. Gill (Na+, K+)-ATPase from the Amazon River shrimp, Macrobrachium amazonicum (Decapoda, Palaemonidae): effect of exogenous biogenic amines on enzyme activity in juveniles and adults. Hydrobiologia, v. 789, n. 1, p. 59-76, MAR 2017. Citações Web of Science: 5.
PINTO, MARCELO R.; LUCENA, MALSON N.; FALEIROS, ROGERIO OLIVEIRA; ALMEIDA, EDUARDO ALVES; MCNAMARA, JOHN C.; LEONE, FRANCISCO A. Effects of ammonia stress in the Amazon river shrimp Macrobrachium amazonicum (Decapoda, Palaemonidae). AQUATIC TOXICOLOGY, v. 170, p. 13-23, JAN 2016. Citações Web of Science: 20.
LEONE, FRANCISCO A.; GARCON, DANIELA P.; LUCENA, MALSON N.; FALEIROS, ROGERIO O.; AZEVEDO, SERGIO V.; PINTO, MARCELO R.; MCNAMARA, JOHN C. Gill-specific (Na+, K+)-ATPase activity and alpha-subunit mRNA expression during low-salinity acclimation of the ornate blue crab Callinectes ornatus (Decapoda, Brachyura). COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY B-BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY, v. 186, p. 59-67, AUG 2015. Citações Web of Science: 13.

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