| Processo: | 13/22605-1 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de julho de 2014 |
| Data de Término da vigência: | 30 de junho de 2016 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia |
| Pesquisador responsável: | Francisco de Assis Leone |
| Beneficiário: | Francisco de Assis Leone |
| Instituição Sede: | Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | Ribeirão Preto |
| Pesquisadores associados: | Carlos Frederico Leite Fontes ; Daniela Pereira Garçon ; Fernando Luis Medina Mantelatto ; John Campbell McNamara ; Marcelo Rodrigues Pinto |
| Assunto(s): | Estresse oxidativo ATPase trocadora de sódio-potássio Crustáceos Cinética |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | brânquia | Cardisoma guanhumi | Estresse oxidativo | Fxyd2 | K+-ATPase | Na+ | Osmorregulação | (Na+, K+)-ATPase |
Resumo
Este projeto é uma continuidade da linha de pesquisa, que vem sendo apoiada pela FAPESP (2013/00976-8; 2013/24252-9; 2010/17534-0; 2010/16115-3; 2010/06395-9; 2006/56435-1; 2006/56759-1; 2003/01233-7) e cujo objetivo é o estudo sistemático das propriedades estruturais e cinéticas da (Na, K)-ATPase do tecido branquial de diferentes espécies de caranguejos e camarões, com o objetivo de se tentar estabelecer um modelo para a adaptação dos crustáceos a ambientes de diferentes salinidades. A manutenção da osmolalidade da hemolinfa dos crustáceos é atribuída à (Na, K)-ATPase e este mecanismo de adaptação sugere que as respostas dos crustáceos envolvem uma rápida ativação do transporte de íons que deve ser primária a qualquer outra resposta fisiológica deste animal. Com relação ao projeto em tela pretende-se investigar a sinalização celular vinculada à regulação da (Na,K)-ATPase de Cardisoma guanhumi bem como suas consequências diretas na captação de NaCl através das brânquias durante a aclimatação a ambientes hiposalinos (abaixo de 300 salinidade) e a ambientes marinhos (cerca de 330 salinidade). Para isso serão realizados os seguintes estudos: 1) preparação da (Na,K)-ATPase do tecido branquial de C. guanhumi. 2) caracterização cinética da atividade da Na,K-ATPase de C. guanhumi em relação aos ligantes ATP, PNPP, sódio, potássio, magnésio, amônio e ouabaína. 3) análise da expressão da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi. 4) localização subcelular da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi através de ensaios imunohistoquímicos. 5) quantificação das atividades das enzimas que participam do estresse oxidativo em animais aclimatados em diferentes condições. 6) Estudo de fosforilação da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi. (fosforilação da enzima em condições adequadas de íons; efeito de poliaminas na estabilidade da fosfoenzima; efeito de poliaminas na desfosforilação da enzima na presença de potássio; análise por western blot do FXYD2 após fosforilação por PKA e PKC; preparação e extração do FXYD2 fosforilado). 7) Regulação da atividade da (Na,K)-ATPase branquial de C. guanhumi. pelo FXYD2 exógeno. 8) Estudo da ação de poliaminas na atividade da (Na,K)-ATPase. 9) Padronização de um protocolo de cultura de células branquiais. 10) Correlacionar o FXYD2 com PKA estimuladas por poliaminas e com a atividade da (Na,K)-ATPase branquial de C. guanhumi em diferentes condições de salinidade usando cultura de células branquiais. 11) análise da atividade da Na,K-ATPase branquial de C. guanhumi aclimatado em diferentes condições (salinidade, amônio, nitrito, metais pesados). (AU)
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