Clonagem, expressão e análise da interação da proteína M2-1 de HRSV com Flavonides: busca para alvos no bloqueio da replicação viral

• Processo: 13/24355-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de agosto de 2014 - 31 de julho de 2016
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Fátima Pereira de Souza
• Beneficiário: Fátima Pereira de Souza
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Fernando Alves de Melo ; Karina Alves de Toledo ; Luis Octávio Regasini ; Marcelo Andrés Fossey
• Assunto(s): Virologia Vírus sincicial respiratório humano Expressão de proteínas Clonagem Biofísica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biofísica | clonagem | Expressão de proteínas | inibidores | Rsv | Virologia

Resumo

O Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) é o principal agente causador de doenças respiratórias agudas severas (ARI), como pneumonia e bronquiolite. Trata-se de um vírus da família Paramyxoviridae, com simetria helicoidal e envelope lipídico. Possui um genoma de RNA fita simples, não segmentado, com 10 genes codificantes. Um dos fatores que contribuem para o sucesso na replicação viral é a interação da M2-1 com as proteínas P, M e com o RNA. Tal proteína pode agir através da interação com RNA e assim participar efetivamente no processo de replicação viral bem como atuar de forma a auxiliar no silenciamento do complexo ribonucleoprotéico (RNP) do RSV. Deste modo o ligante que realizar interação com a M2-1 é um potencial candidato a prevenir as interações M2-1 com RNA e demais proteínas, impedindo deste modo o sucesso da replicação viral. Para investigar a interação de um potencial candidato a inibição da atividade da M2-1 o objetivo do projeto é clonar, expressar e purificar a proteína M2-1 do hRSV e, em seguida, determinar sua característica físico-química de interação com flavonóides em diferentes condições de temperatura. Para clonagem e expressão do gene M2-1 foram escolhidos o vetor pET28A e a bactéria Escherichia coli da linhagem BL21. A proteína expressa será purificada em cromatografia de afinidade e cromatografia de troca iônica. A estabilidade térmica e interação com flavonóides serão analisadas por espectroscopia. Os resultados do presente estudo propiciarão conhecer a estabilidade da proteína e o sítio de interação de pequenos ligantes, possibilitando obter modelo de interação e propor modelos terapêuticos eficientes. A longo prazo a estrutura da proteína poderá ser determinada, para ensaios mais refinados localizando, assim, o sítio de ligação destes flavonóides. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

GUIMARAES, GIOVANA C.; PIVA, HEMILY R. M.; ARAUJO, GABRIELA C.; LIMA, CAROLINE S.; REGASINI, LUIS O.; DE MELO, FERNANDO A.; FOSSEY, MARCELO A.; CARUSO, ICARO P.; SOUZA, FATIMA P.. Binding investigation between M2-1protein from hRSV and acetylated quercetin derivatives: H-1 NMR, fluorescence spectroscopy, and molecular docking. International Journal of Biological Macromolecules, v. 111, p. 33-38, MAY 2018. (13/24355-2, 09/53989-4)

PANCONATO TEIXEIRA, THIAGO SALEM; CARUSO, ICARO PUTINHON; PEREIRA LOPES, BRUNO RAFAEL; REGASINI, LUIS OCTAVIO; DE TOLEDO, KARINA ALVES; FOSSEY, MARCELO ANDRES; DE SOUZA, FATIMA PEREIRA. Biophysical characterization of the interaction between M2-1 protein of hRSV and quercetin. International Journal of Biological Macromolecules, v. 95, p. 63-71, FEB 2017. (13/24355-2)

DE LOURENCO, ISABELLA OTTENIO; QUINTINO, EVELYN TOSCANO PEDROSO; PEREIRA, MATHEUS HENRIQUE; LIMA, CAROLINE SPRENGEL; ARAUJO, GABRIELA CAMPOS; REGASINI, LUIS OCTAVIO; MELO, FERNANDO ALVES DE; SOUZA, FATIMA PEREIRA DE; FOSSEY, MARCELO ANDRES; CARUSO, ICARO PUTINHON. Biophysical studies of the interaction of hRSV Non-Structural 1 protein with natural flavonoids and their acetylated derivatives by spectroscopic techniques and computational simulations. SPECTROCHIMICA ACTA PART A-MOLECULAR AND BIOMOLECULAR SPECTROSCOPY, v. 283, p. 12-pg., 2022-08-13. (13/24355-2, 10/18169-3, 15/18868-2)