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Efeito da laserterapia sobre a expressão gênica e a produção de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento envolvidos no reparo muscular

Processo: 13/07502-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de agosto de 2014 - 31 de janeiro de 2017
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Fisioterapia e Terapia Ocupacional
Pesquisador responsável:Kristianne Porta Santos Fernandes
Beneficiário:Kristianne Porta Santos Fernandes
Instituição-sede: Universidade Nove de Julho (UNINOVE). Campus Vergueiro. São Paulo , SP, Brasil
Pesq. associados:Fabio Daumas Nunes ; Raquel Agnelli Mesquita Ferrari
Assunto(s):Terapia a laser  Terapia a laser de baixa intensidade  Regeneração muscular  Expressão gênica  Macrófagos  Citocinas  Quimiocinas 

Resumo

As interações entre o músculo e os macrófagos que o invadem após a ocorrência da lesão são determinantes para a evolução do reparo deste tecido. Por outro lado, o laser em baixa intensidade (LBI) tem sido muito utilizado no tratamento destas lesões no âmbito clínico e no experimental, mas pouco se conhece a respeito dos seus efeitos sobre os macrófagos. Os objetivos deste projeto são avaliar o efeito do LBI (em 2 parâmetros dosimétricos) sobre: a expressão gênica e a síntese protéica de 12 produtos (importantes no processo de reparo do músculo esquelético) de macrófagos ativados (para os fenótipos M1, M2a e M2c); a diferenciação e a fusão de células precursoras miogênicas (C2C12) cultivadas com sobrenadantes de macrófagos ativados; o fenótipo dos macrófagos presentes no músculo tibial anterior de ratos após lesão aguda; e a expressão imuno-histoquímica de 2 proteínas (as mais moduladas nas avaliações in vitro) no músculo tibial anterior de ratos após lesão aguda. As duas combinações de parâmetros dosimétricos do LBI serão escolhidas pela sua capacidade em modular a produção de IL-6 e de TNF-alpha em experimento dose-resposta. Posteriormente, culturas de macrófagos J774 serão ativadas por 24h, lavadas e irradiadas nos 2 parâmetros dosimétricos escolhidos considerando a curva dose-resposta. Passados os períodos de incubação de 4 e 24 h, será realizada a análise da expressão das quimiocinas cxcl2 (MIP-2a), ccl 2 (Mcp-1), ccl 3 (Mip-1a), ccl4 (Mip-1b); das citocinas IL-1beta, IFN gamma, IL-6, TNF alpha, IL-13; e dos fatores de crescimento TGF beta1, IGF1 e Vegfa por meio de PCR array. O sobrenadante das culturas dos diferentes grupos experimentais (após 24 horas das irradiações) será utilizado para avaliar a produção protéica dos macrófagos e também para tratar células precursoras miogênicas (C2C12) com intuito de analisar sua influência sobre a diferenciação e fusão destas células. Em cada situação experimental, células não irradiadas e não ativadas servirão como controle. Serão realizados três experimentos independentes, em cada metodologia citada. Para a análise in vivo, serão utilizados ratos Wistar, divididos em 04 grupos: controle (n=5); lesão muscular sem tratamento (n=15); lesão muscular tratada com LBI parâmetro 1(n=15) e lesão muscular tratada com LBI parâmetro 2 (n=15). Após 2, 4, e 7 dias, os animais serão sacrificados e os músculos retirados e processados para análise por imuno-histoquímica. Serão identificados os macrófagos do perfil M1 (marcação de CD68 e CD80), M2a (marcação de CD206) e M2c (marcação de CD163) e duas proteínas cuja produção tenha sido mais evidentemente modulada pelo LBI nos estudo in vitro. Os dados de imuno-expressão serão correlacionados com as diferentes etapas do processo de reparo do músculo esquelético. Todos os resultados serão submetidos à análise estatística. (AU)

Publicações científicas (6)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ANDREO, LUCAS; SOLDERA, CARLA A.; RIBEIRO, BEATRIZ GUIMARAES; VICENTE DE MATOS, PATRICK RAOUL; SOUSA, PAOLA BINDES; DE ALCANTARA ARAUJO AMORIM, WESLLEY WALLACE; RATTO TEMPESTINI HORLIANA, ANNA CAROLINA; BUSSADORI, SANDRA KALIL; SANTOS FERNANDES, KRISTIANNE PORTA; MESQUITA-FERRARI, RAQUEL AGNELLI. Effects of Photobiomodulation on Functionality in Wistar Rats with Sciatic Nerve Injury. Photochemistry and Photobiology, v. 95, n. 3, p. 879-885, MAY 2019. Citações Web of Science: 0.
SCHALCH, TATIANA DIAS; FERNANDES, MARIA HELENA; SETUBAL DESTRO RODRIGUES, MARIA FERNANDA; GUIMARAES, DOUGLAS MAGNO; NUNES, FABIO DAUMAS; RODRIGUES, JOAO COSTA; GARCIA, MONICA PEREIRA; MESQUITA FERRARI, RAQUEL AGNELLI; BUSSADORI, SANDRA KALIL; SANTOS FERNANDES, KRISTIANNE PORTA. Photobiomodulation is associated with a decrease in cell viability and migration in oral squamous cell carcinoma. Lasers in Medical Science, v. 34, n. 3, p. 629-636, APR 2019. Citações Web of Science: 1.
SOUZA, NADHIA H. C.; MESQUITA-FERRARI, RAQUEL A.; RODRIGUES, MARIA FERNANDA S. D.; DA SILVA, DANIELA F. T.; RIBEIRO, BEATRIZ G.; ALVES, AGNELO N.; GARCIA, MONICA P.; NUNES, FABIO D.; DA SILVA JUNIOR, EVALDO M.; FRANCA, CRISTIANE M.; BUSSADORI, SANDRA K.; FERNANDES, KRISTIANNE P. S. Photobiomodulation and different macrophages phenotypes during muscle tissue repair. JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR MEDICINE, v. 22, n. 10, p. 4922-4934, OCT 2018. Citações Web of Science: 2.
ANDREO, L.; SOLDERA, C. B.; RIBEIRO, B. G.; DE MATOS, P. R. V.; BUSSADORI, S. K.; FERNANDES, K. P. S.; MESQUITA-FERRARI, R. A. Effects of photobiomodulation on experimental models of peripheral nerve injury. Lasers in Medical Science, v. 32, n. 9, p. 2155-2165, DEC 2017. Citações Web of Science: 5.
DA SILVA JUNIOR, EVALDO MOREIRA; MESQUITA-FERRARI, RAQUEL AGNELLI; FRANCA, CRISTIANE MIRANDA; ANDREO, LUCAS; BUSSADORI, SANDRA KALIL; SANTOS FERNANDES, KRISTIANNE PORTA. Modulating effect of low intensity pulsed ultrasound on the phenotype of inflammatory cells. BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY, v. 96, p. 1147-1153, DEC 2017. Citações Web of Science: 2.
DO VALE, KATIA LLANOS; MARIA, DURVANEI AUGUSTO; PICOLI, LARA CRISTINA; DEANA, ALESSANDRO MELO; MASCARO, MARCELO BETTI; MESQUITA FERRARI, RAQUEL AGNELLI; BUSSADORI, SANDRA KALIL; SANTOS FERNANDES, KRISTIANNE PORTA. The Effects of Photobiomodulation Delivered by Light-Emitting Diode on Stem Cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth: A Study on the Relevance to Pluripotent Stem Cell Viability and Proliferation. Photomedicine and Laser Surgery, v. 35, n. 12, p. 659-665, DEC 2017. Citações Web of Science: 0.

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