Efeito do laser em baixa intensidade sobre a expressão gênica e proteica de difere...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 13/07502-1 |
| Linha de fomento: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Vigência: | 01 de agosto de 2014 - 31 de janeiro de 2017 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Fisioterapia e Terapia Ocupacional |
| Pesquisador responsável: | Kristianne Porta Santos Fernandes |
| Beneficiário: | Kristianne Porta Santos Fernandes |
| Instituição-sede: | Universidade Nove de Julho (UNINOVE). Campus Vergueiro. São Paulo , SP, Brasil |
| Pesq. associados: | Fabio Daumas Nunes ; Raquel Agnelli Mesquita Ferrari |
| Assunto(s): | Terapia a laser Terapia a laser de baixa intensidade Regeneração muscular Expressão gênica Macrófagos Citocinas Quimiocinas |
Resumo
As interações entre o músculo e os macrófagos que o invadem após a ocorrência da lesão são determinantes para a evolução do reparo deste tecido. Por outro lado, o laser em baixa intensidade (LBI) tem sido muito utilizado no tratamento destas lesões no âmbito clínico e no experimental, mas pouco se conhece a respeito dos seus efeitos sobre os macrófagos. Os objetivos deste projeto são avaliar o efeito do LBI (em 2 parâmetros dosimétricos) sobre: a expressão gênica e a síntese protéica de 12 produtos (importantes no processo de reparo do músculo esquelético) de macrófagos ativados (para os fenótipos M1, M2a e M2c); a diferenciação e a fusão de células precursoras miogênicas (C2C12) cultivadas com sobrenadantes de macrófagos ativados; o fenótipo dos macrófagos presentes no músculo tibial anterior de ratos após lesão aguda; e a expressão imuno-histoquímica de 2 proteínas (as mais moduladas nas avaliações in vitro) no músculo tibial anterior de ratos após lesão aguda. As duas combinações de parâmetros dosimétricos do LBI serão escolhidas pela sua capacidade em modular a produção de IL-6 e de TNF-alpha em experimento dose-resposta. Posteriormente, culturas de macrófagos J774 serão ativadas por 24h, lavadas e irradiadas nos 2 parâmetros dosimétricos escolhidos considerando a curva dose-resposta. Passados os períodos de incubação de 4 e 24 h, será realizada a análise da expressão das quimiocinas cxcl2 (MIP-2a), ccl 2 (Mcp-1), ccl 3 (Mip-1a), ccl4 (Mip-1b); das citocinas IL-1beta, IFN gamma, IL-6, TNF alpha, IL-13; e dos fatores de crescimento TGF beta1, IGF1 e Vegfa por meio de PCR array. O sobrenadante das culturas dos diferentes grupos experimentais (após 24 horas das irradiações) será utilizado para avaliar a produção protéica dos macrófagos e também para tratar células precursoras miogênicas (C2C12) com intuito de analisar sua influência sobre a diferenciação e fusão destas células. Em cada situação experimental, células não irradiadas e não ativadas servirão como controle. Serão realizados três experimentos independentes, em cada metodologia citada. Para a análise in vivo, serão utilizados ratos Wistar, divididos em 04 grupos: controle (n=5); lesão muscular sem tratamento (n=15); lesão muscular tratada com LBI parâmetro 1(n=15) e lesão muscular tratada com LBI parâmetro 2 (n=15). Após 2, 4, e 7 dias, os animais serão sacrificados e os músculos retirados e processados para análise por imuno-histoquímica. Serão identificados os macrófagos do perfil M1 (marcação de CD68 e CD80), M2a (marcação de CD206) e M2c (marcação de CD163) e duas proteínas cuja produção tenha sido mais evidentemente modulada pelo LBI nos estudo in vitro. Os dados de imuno-expressão serão correlacionados com as diferentes etapas do processo de reparo do músculo esquelético. Todos os resultados serão submetidos à análise estatística. (AU)