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Estudos do papel da fosforilação e da ligação de proteínas parceiras na regulação da função de miosinas V humanas

Processo: 14/09720-9
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de outubro de 2014 - 31 de março de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
Pesquisador responsável:Mário Tyago Murakami
Beneficiário:Mário Tyago Murakami
Instituição-sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Pesq. associados:Priscila Oliveira de Giuseppe
Assunto(s):Fosforilação  Cristalografia estrutural  Miosina tipo V  Proteínas monoméricas de ligação ao GTP 

Resumo

Neste próximo projeto continuaremos nossos estudos, como anteriormente, nas MioVs. A combinação de abordagens estruturais e funcionais será mantida e nosso objetivo consistirá em responder novas perguntas que surgiram ao longo desses dois anos de trabalho.Primeiramente, queremos saber qual o papel da fosforilação do CBD na regulação da função de MioV de mamíferos. Para tanto, pretendemos resolver a estrutura da forma fosfo-mimética do CBD de MioVa, investigar se a fosforilação interfere no mecanismo de auto-inibição desse motor molecular e testar se ela determina a seletividade de proteínas parceiras.Nossa segunda pergunta é sobre o papel do splicing alternativo no reconhecimento e seletividade de parceiros moleculares para MioV. Nesse caso, realizaremos ensaios de duplo híbrido usando como iscas construções que contenham o CBD de MioVa fusionados a diferentes combinações de exons do domínio coiled coil. Paralelamente, realizaremos o mesmo ensaio usando como isca construções de MioVb e MioVc similares as construídas para MioVa, a fim de se obter informações a respeito de redundância e divergência funcional entre essas três proteínas parálogas. Para melhor entender os determinantes estruturais para o reconhecimento de proteínas parceiras por MioVs, pretendemos estudar complexos entre as proteínas Rab (Ras-like small GTPases) 3a, 8a, 10 e 39b e domínios de MioV por cristalografia, SAXS e outras técnicas que se fizerem necessárias. Tais interações foram recentemente identificadas por Lindsay e colaboradores (Lindsay, et al. 2013). Interessantemente, Rab3a e 39b interagem com o CBD de MioVa enquanto que Rab 8a e Rab10 se ligam em regiões específicas do domínio coiled coil que sofrem splicing alternativo (Lindsay, et al. 2013). Esse conjunto de informações terá uma grande contribuição para o entendimento de aspectos estruturais e funcionais das miosinas de classe V. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DOLCE, LUCIANO G.; OHBAYASHI, NORIHIKO; DA SILVA, DANIEL F. C.; FERRARI, ALLAN J. R.; PIROLLA, RENAN A. S.; SCHWARZER, ANA C. DE A. P.; ZANPHORLIN, LETICIA M.; CABRAL, LUCELIA; FIORAMONTE, MARIANA; RAMOS, CARLOS H. I.; GOZZO, FABIO CESAR; FUKUDA, MITSUNORI; DE GIUSEPPE, PRISCILA O.; MURAKAMI, MARIO T. Unveiling the interaction between the molecular motor Myosin Vc and the small GTPase Rab3A. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 212, FEB 10 2020. Citações Web of Science: 0.
DOLCE, LUCIANO G.; SILVA-JUNIOR, RUI M. P.; ASSIS, LEANDRO H. P.; NASCIMENTO, ANDREY F. Z.; ARAUJO, JACKELINE S.; MESCHEDE, INGRID P.; ESPREAFICO, ENILZA M.; DE GIUSEPPE, PRISCILA O.; MURAKAMI, MARIO T. Myosin Va interacts with the exosomal protein spermine synthase. BIOSCIENCE REPORTS, v. 39, n. 3 MAR 29 2019. Citações Web of Science: 1.
ASSIS, L. H. P.; SILVA-JUNIOR, R. M. P.; DOLCE, L. G.; ALBORGHETTI, M. R.; HONORATO, R. V.; NASCIMENTO, A. F. Z.; MELO-HANCHUK, T. D.; TRINDADE, D. M.; TONOLI, C. C. C.; SANTOS, C. T.; OLIVEIRA, P. S. L.; LARSON, R. E.; KOBARG, J.; ESPREAFICO, E. M.; GIUSEPPE, P. O.; MURAKAMI, M. T. The molecular motor Myosin Va interacts with the cilia-centrosomal protein RPGRIP1L. SCIENTIFIC REPORTS, v. 7, MAR 7 2017. Citações Web of Science: 15.
SANTOS, CLELTON A.; ZANPHORLIN, LET-CIA M.; CRUCELLO, ALINE; TONOLI, CELISA C. C.; RULLER, ROBERTO; HORTA, MARIA A. C.; MURAKAMI, MARIO T.; DE SOUZA, ANETE PEREIRA. Crystal structure and biochemical characterization of the recombinant ThBgl, a GH1 beta-glucosidase overexpressed in Trichoderma harzianum under biomass degradation conditions. BIOTECHNOLOGY FOR BIOFUELS, v. 9, MAR 22 2016. Citações Web of Science: 9.

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