Caracterização funcional de camundongos e células nocaute para os genes que codificam as proteínas regulatórias Ki-1/57 e CGI-55

• Processo: 14/21700-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2017
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Jörg Kobarg
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Oncoproteínas Linfoma Proteína de ligação a hialuronatos Células-tronco pluripotentes Superexpressão gênica Regulação da expressão gênica RNA mensageiro Sistemas CRISPR-Cas CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Camundongos Nocaute | CRISP-Cas technology | função de genes | onco-proteínas | proteína reguladora | stress response | camundongos knock out

Resumo

Ki-1/57 foi descoberta através da reatividade cruzada com um anticorpo monoclonal Ki-1, o primeiro anticorpo descrito para detectar células de linfoma de Hodgkin. Estudos preliminares dessa proteína revelaram características muito comuns a onco-proteínas. Experimentos de duplo-híbrido em leveduras identificaram proteínas parceiras envolvidas no controle da transcrição e metabolismo de RNA. Muitas delas são proteínas que se ligam diretamente a p53 ou fazem parte da família p53, fator de transcrição supressor tumoral e um importante mediador de resposta ao estresse celular. Foi identificado também que Ki-1/57 interage com proteínas envolvidas em splicing, colocaliza com grânulos de estresse e é sumoilada. Dados de experimentos de microarray, publicados recentemente pelo nosso grupo, oferecem uma nova perspectiva da função de Ki-1/57, o seu envolvimento em mecanismos de resposta celular a estresse, uma vez que sua superexpressão levou a repressão de genes envolvidos na proliferação e morte celular. Em conjunto com as informações de interação proteína-proteína disponíveis, esses dados de microarray e localização subcelular, sugerem que a ação de Ki-1/57, sob essas condições, ocorreria nos diferentes níveis do controle da expressão gênica, desde transcrição à tradução. Com o intuito de avaliar com maior profundidade as possíveis funções de Ki-1/57 pretendemos realizar superexpressão de Ki-1/57 e p53, seguidos de estudos de ciclo celulares e estresse. Ki-1/57 também tem sido relacionada com câncer, tendo sido observada sua expressão em células tumorais. Pretendemos investigar melhor o papel de Ki-1/57 e CGI-55 na regulação da expressão gênica através da identificação do perfil dos RNAs mensageiros (mRNAs) alvos de Ki-1/57 e CGI-55 e mapear os seus sítios de ligação no RNA através de cross-linking immunoprecipitation seguido de sequenciamento de nova geração (CLIP-seq). Além disso, estamos em fases avançadas de geração de um camundongo nocaute para o gene Ki-1/57. Conseguimos gerar animais mosaicos nocautes para Ki-1/57 utilizando o novo sistema CRISPR/Cas9. Também já temos células-tronco embrionárias (ES) heterozigotas nocaute para Ki-1/57 que foram geradas pelo método clássico de recombinação homóloga em células-tronco embrionárias. Estamos investigando o papel de Ki-1/57 em células-tronco pluripotentes e na diferenciação neuronal e em cardiomiócitos. Em primeiras injeções das células ES nocaute de Ki-1/57 em blastocistos obtivemos animais quimeras. Grande parte do projeto trataria da caracterização histológica, morfológica, fisiológica e funcional de animais nocaute Ki-1/57 hetero e homozigotos comparado com animais selvagens. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

PEREZ, ARINA MARINA; AQUINO, BRUNO; VIVIANI, VADIM; KOBARG, JORG. Use of a special Brazilian red-light emitting railroad worm Luciferase in bioassays of NEK7 protein Kinase and Creatine Kinase. BMC BIOCHEMISTRY, v. 18, JUL 19 2017. (11/20086-1, 13/09594-0, 14/21700-3, 12/22265-3)

SAITO, ANGELA; SOUZA, EDMARCIA E.; COSTA, FERNANDA C.; MEIRELLES, GABRIELA V.; GONCALVES, KALIANDRA A.; SANTOS, MARCOS T.; BRESSAN, GUSTAVO C.; MCCOMB, MARK E.; COSTELLO, CATHERINE E.; WHELAN, STEPHEN A.; et al. Human Regulatory Protein Ki-1/57 Is a Target of SUMOylation and Affects PML Nuclear Body Formation. JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH, v. 16, n. 9, p. 3147-3157, SEP 2017. (14/21700-3, 08/57906-3)