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Isolamento e caracterização de Lactobacillus spp. da cavidade bucal e sua ação probiótica sob Candida Albicans e Streptococcus mutans

Processo: 15/09770-9
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de novembro de 2015 - 31 de outubro de 2017
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia
Pesquisador responsável:Juliana Campos Junqueira
Beneficiário:Juliana Campos Junqueira
Instituição-sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
Assunto(s):Probióticos  Microbiologia oral  Lactobacillus  Candida albicans  Galleria mellonella  Streptococcus mutans  Caenorhabditis elegans 

Resumo

O objetivo desse estudo será isolar e identificar cepas de Lactobacillus spp. da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar sua ação probiótica sob Candida albicans e Streptococcus mutans por meio de estudos in vitro e in vivo. Amostras de saliva serão semeadas em ágar MRS e as colônias isoladas serão identificadas pelo sistema API50CHL e confirmadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Trinta cepas identificadas como Lactobacillus serão submetidas aos testes para estudo da ação inibitória sobre C. albicans e S. mutans. Para o estudo de C. albicans, serão avaliados os efeitos das cepas de Lactobacillus sobre a formação de biofilme e capacidade de filamentação de C. albicans in vitro. A seguir, serão selecionadas 10 cepas que apresentarem melhor ação inibitória sobre C. albicans para o estudo in vivo utilizando-se os modelos hospedeiros de Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans. No modelo de G. mellonella, a infecção experimental será avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa e densidade hemocitária. No modelo de C. elegans, a infecção será avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL no trato intestinal dos nemátodos e estudo da filamentação de C. albicans. Além disso, será realizada a quantificação da expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1 de C. albicans em biofilmes monotípicos e heterotípicos com Lactobacillus, utilizando o ensaio de PCR em Tempo Real (qPCR). Em relação ao estudo de S. mutans, as 30 cepas de Lactobacillus serão submetidas aos testes de atividade antibacteriana contra S. mutans em crescimento planctônico. A seguir, 10 cepas que apresentarem maior atividade antibacteriana serão selecionadas para o estudo dos efeitos antimicrobianos sobre biofilmes de S. mutans formados em discos de hidroxiapatita. Para estudo in vivo, será selecionada uma cepa de Lactobacillus com maior efeito inibitório sobre biofilme de S. mutans, a fim de avaliar seus efeitos no desenvolvimento de cárie experimental em ratos por meio da contagem de UFC/mL do biofilme dentário e quantificação de lesões de cárie dentária. Os resultados serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento desse estudo. (AU)

Publicações científicas (8)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SANTOS, RAFAELLA BRAGA; SCORZONI, LILIANA; NAMBA, ANDRESSA MAYUMI; ROSSONI, RODNEI DENNIS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Lactobacillus species increase the survival of Galleria mellonella infected with Candida albicans and non-albicans Candida clinical isolates. Medical Mycology, v. 57, n. 3, p. 391-394, APR 2019. Citações Web of Science: 4.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; DOS SANTOS, JESSICA DIANE; CHIPOLETTI DOS SANTOS PRADO, ANA CAROLINA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; ANBINDER, ANA LIA; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Inhibitory effect of probiotic Lactobacillus supernatants from the oral cavity on Streptococcus mutans biofilms. Microbial Pathogenesis, v. 123, p. 361-367, OCT 2018. Citações Web of Science: 1.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; ALVES FIGUEIREDO, LIVIA MARA; MARTINS, CAROLINA PISTILLE; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Clinical strains of Lactobacillus reduce the filamentation of Candida albicans and protect Galleria mellonella against experimental candidiasis. Folia Microbiologica, v. 63, n. 3, p. 307-314, MAY 2018. Citações Web of Science: 7.
DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; SCORZONI, LILIANA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DE OLIVEIRA FUGISAKI, LUCIANA RUANO; FUCHS, BETH BURGWYN; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; ROSSONI, RODNEI DENNIS. Lactobacillus paracasei 28.4 reduces in vitro hyphae formation of Candida albicans and prevents the filamentation in an experimental model of Caenorhabditis elegans. Microbial Pathogenesis, v. 117, p. 80-87, APR 2018. Citações Web of Science: 4.
DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; ROSSONI, RODNEI DENNIS; FREIRE, FERNANDA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DAS CHAGAS LOPES, LUCAS ALEXANDRE; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO. Candida tropicalis affects the virulence profile of Candida albicans: an in vitro and in vivo study. PATHOGENS AND DISEASE, v. 76, n. 2 MAR 2018. Citações Web of Science: 3.
JORJAO, ADELINE L.; OLIVEIRA, LUCIANE D.; SCORZONI, LILIANA; FIGUEIREDO-GODOI, LIVIA MARA A.; PRATA, MARCIA CRISTINA A.; JORGE, ANTONIO OLAVO C.; JUNQUEIRA, JULIANA C. From moths to caterpillars: Ideal conditions for Galleria mellonella rearing for in vivo microbiological studies. VIRULENCE, v. 9, n. 1, p. 383-389, 2018. Citações Web of Science: 8.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; FUCHS, BETH BURGWYN; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Antifungal activity of clinical Lactobacillus strains against Candida albicans biofilms: identification of potential probiotic candidates to prevent oral candidiasis. BIOFOULING, v. 34, n. 2, p. 212-225, 2018. Citações Web of Science: 12.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; FUCHS, BETH BURGWYN; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS. Lactobacillus paracasei modulates the immune system of Galleria mellonella and protects against Candida albicans infection. PLoS One, v. 12, n. 3 MAR 7 2017. Citações Web of Science: 20.

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