Desenvolvimento e padronização de DNA microarray e Loop mediated isothermal amplification (LAMP) para identificação de fungos patogênicos em espécimes clínicos

• Processo: 15/25035-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2018
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Maria Luiza Moretti
• Beneficiário: Maria Luiza Moretti
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Angelica Zaninelli Schreiber ; Ariane Fidelis Busso Lopes ; Cibele Aparecida Tararam ; Plinio Trabasso
• Assunto(s): Técnicas de diagnóstico molecular Doenças transmissíveis Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diagnóstico Molecular | DNA microarray | infecção fúngica | Lamp | Micologia Média | Doenças Infecciosas

Resumo

O diagnóstico do agente etiológico da infecção é o ponto chave para a escolha precoce e adequada da terapia antifúngica. A identificação fúngica convencional depende da combinação de análises microscópicas diretamente no material clínico coletado e isolamento do micro-organismo em cultura. Essas técnicas possuem baixa sensibilidade e, muitas vezes, a identificação do patógeno é demorada devido ao período necessário para crescimento em cultura de alguns fungos. Nesse contexto, as metodologias moleculares são uma ferramenta promissora que reduzem o tempo de identificação e permitem um diagnóstico preciso, principalmente na determinação de gênero e de espécies. Com base nessas informações, os objetivos principais desse trabalho são (i) padronizar sondas de uma plataforma de DNA microarray para identificação de Candida albicans, Candida dubliniensis, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Fusarium sp., complexo de espécies Fusarium solani e Histoplasma capsulatum a partir de isolados em cultura e, a seguir, diretamente de amostras clínicas de hemocultura, sangue total, líquido céfalo-raquideo e líquido ascítico e, (ii) desenvolver e padronizar um ensaio de Loop mediated isothermal amplification (LAMP) para identificação e diferenciação entre as espécies de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii a partir de liquido céfalo-raquídeo de pacientes com meningite criptocócica. Dessa forma, esse estudo visa padronizar testes moleculares que permitam maior agilidade e sensibilidade na identificação dos patógenos fúngicos mais frequentemente envolvidos em infecções humanas. Uma vez padronizados, esses testes podem ser implementados futuramente, na rotina diagnóstica, principalmente para identificação de fungos patogênicos diretamente de amostras clínicas. É objetivo deste grupo de pesquisa depositar os resultados como patente para que, posteriormente, possam ser desenvolvidos por uma indústria de biotecnologia para uso na prática clínica. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

P. STIVANELLI; C.A. TARARAM; P. TRABASSO; L.O. LEVY; M.S.C. MELHEM; A.Z. SCHREIBER; M.L. MORETTI. Visible DNA microarray and loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the identification of Cryptococcus species recovered from culture medium and cerebrospinal fluid of patients with meningitis. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, v. 53, n. 11, 2020-10-09. (16/12414-2, 15/25035-7)

PONTES, LAIS; BERAQUET, CAIO AUGUSTO GUALTIERI; ARAI, TEPPEI; WATANABE, AKIRA; MORETTI, MARIA LUIZA; SCHREIBER, ANGELICA ZANINELLI. Selection of Aspergillus fumigatus isolates carrying the G448S substitution in CYP51A gene after long-term treatment with voriconazole in an immunocompromised patient. MEDICAL MYCOLOGY CASE REPORTS, v. 36, p. 5-pg., 2022-02-22. (15/25035-7)