Efeito imunomodulatório de bactérias probióticas:análise em monócitos periféricos ...
- Auxílios pontuais (curta duração)
Resumo
Esta proposta visa estabelecer fundamentos para o desenvolvimento de novas estratégias para o controle das periodontites. A hipótese é que o equilíbrio na relação microbiota oral-resposta imune, perdido na periodontite, poderia ser recuperado pelo favorecimento da colonização da cavidade oral por bactérias benéficas e pela modulação da resposta imune. O primeiro subprojeto visa testar se a saliva difere de acordo com condições periodontais, identificando biomarcadores potenciais em pacientes com periodontite agressiva localizada e crônica, e seus controles normais. Microbioma será determinado por sequenciamento de 16SrRNA em amostras orais e fezes. Proteoma de saliva de parótida, total e película adquirida será determinado. O exoma expandido será investigado. Esperamos demonstrar que diferenças na composição da saliva, reflexo de variações no genoma, se relacionam às diferenças no microbioma oral associadas a cada condição periodontal. O segundo subprojeto visa confrontar aspectos funcionais da saliva com sua composição. Diferenças na afinidade dos diferentes grupos microbianos à película serão determinadas por ensaios de formação de biofilme, com inóculo de biofilme oral e isolados bacterianos. A atividade antimicrobiana da saliva, sua capacidade de modular a resposta de macrófagos e a degradação serão determinadas, e relacionadas à composição. Na dependência dos resultados iniciais, podem ser obtidas proteínas recombinantes ou peptídeos sintéticos e estes empregados nas análises funcionais. O terceiro subprojeto visa testar se micro-organismos probióticos apresentam relação antagônica à microbiota patogênica. Cepas de Lactobacillus e Bifidobacterium serão avaliadas quanto ao efeito sobre P. gingivalis e A. actinomycetemcomitans. A capacidade de probióticos inibir os patógenos e/ou a expressão de fatores de virulência e a competição por sítios de adesão em células epiteliais gengivais serão determinadas. O efeito dos probióticos na manipulação da microbiota oral e do intestino será avaliado em modelo SHIME® acrescido do ambiente simulando a boca. O efeito de probiótico(s) sobre a composição do biofilme dental e seu potencial cariogênico será determinado em estudo in situ. Esperamos assim selecionar a cepa probiótica capaz de manipular a microbiota oral, por antagonismo aos periodontopatogênos. O quarto subprojeto visa determinar a capacidade de probióticos modular a resposta imune. Ensaios de co-cultura com probióticos, patógenos periodontais e células epiteliais (OBA-09 e primárias), monócitos humanos (THP-1 e de sangue periférico) e BMC murínicas (selvagem e KO IL-1r, IL-18, TLR-2 e TLR-4)diferenciadas em macrófagos, e células dendríticas serão empregados, avaliando citocinas, expressão gênica, vias de sinalização e funcionalidade na diferenciação de subtipos de linfócitos T. Probióticos serão testados em modelo animal de periodontite por P. gingivalis e A. actinomycetemcomitans em camundongos normais e diabéticos. Esperamos selecionar cepa(s) probiótica(s) capazes de colonizar a cavidade oral e induzir resposta que favoreça a microbiota associada a saúde, em equilíbrio com o hospedeiro. Visando testar se probióticos podem ser usados como adjuvantes ao tratamento periodontal, o quinto subprojeto avaliará o efeito de probióticos sobre a microbiota oral e intestinal em humanos, parâmetros clínicos e perfil de citocinas. Pastilhas dos probióticos serão usadas por pacientes tratados periodontalmente, por 180 dias. Esperamos demonstrar que cepas probióticas são capazes de restabelecer o equilíbrio em pacientes em fase de manutenção do tratamento periodontal, e assim propor o seu uso clínico como estratégia terapêutica no controle da periodontite, e possivelmente de outras condições sistêmicas associadas. Estes resultados contribuirão para estabelecimento de estratégias capazes de interferir na disbiose da microbiota e na resposta do hospedeiro à microbiota residente, favorecendo a manutenção da saúde periodontal. (AU)