| Processo: | 16/01379-1 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Pesquisador Visitante - Internacional |
| Data de Início da vigência: | 07 de junho de 2016 |
| Data de Término da vigência: | 06 de agosto de 2016 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular |
| Pesquisador responsável: | Rosangela Itri |
| Beneficiário: | Rosangela Itri |
| Pesquisador visitante: | Maria Eliana Lanio Ruiz |
| Instituição do Pesquisador Visitante: | Universidad de La Habana (UH) , Cuba |
| Instituição Sede: | Instituto de Física (IF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | São Paulo |
| Assunto(s): | Lipossomos Espalhamento de raios X a baixos ângulos Intercâmbio de pesquisadores |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | GUVs | interação proteína-DNA | Itc | lipossomos | Saxs | toxinas formadoras de poro | Interacao proteina-membrana e proteina-DNA |
Resumo
Esticolisinas I and II (Sts/StI and StII) sao proteinas formadoras de poro (PFP), que pertencem a familia de actiniporinas, produzidas pela anemoma marinha Stichodactyla helianthus. Actinoporinas sao secretadas na forma soluvel e incorporadas em membranas onde elas formam poros oligomericos transmembrana com raio de 1 nm, levando a lise celular. Sao caracterizadas com alto Ip (> 9.0), massa molecular de cerca de 20 kDa, não contendo resíduos de cisteina. Embora as Sts apresentem alta similaridade e identidade na sequencia de aminoacidos, St II e' mais ativa que StI. A regiao N-terminal parece ser a responsavel pela formacao de poro e a diferenca de atividade entre elas. Devido ao alto valor de Ip, as Sts possuem uma alta quantidade de carga positiva a pH neutro. Considerando esta caracteristica e a atividade permeabilizante, Sts podem comportar-se como agentes policationicos que se condensam na superficie de acidos nucleicos, capazes de mediar o escape endosomal para expressar ou bloquear a expressão gene-alvo nas células. De fato, resultados obtidos pelo grupo da profa. Lanio (Universidade de Havana, Cuba) sugerem esta possibilidade: St II e' capaz de interagir com DNA formando complexos de DNA-StII a diferentes razoes N/P exibindo diferenças com aqueles formados pelo policátion clássico polietilenimina (PEI). Os complexos de DNA-St II mantiveram a atividade hemolitica da proteina (dados não publicados). Estes resultados suportam a ideia que Sts podem funcionar como sistema de liberação em células. As caracterizacoes estrutural e termodinamica que governam a formacao dos complexos DNA-St II sao muito importantes e necessarias. Neste sentido, a visita da profa Lanio (Un. Havana) para trabalhar em colaboracao com a profa Itri (IFUSP) tem como principal objetivo investigar as propriedades estruturais dos complexos DNA-St II na ausência e presença de membranas através da técnica de SAXS, acoplado a determinação de parâmetros termodinâmicos a serem obtidos pela técnica de calorimetria de titulação isotérmica em colaboração com o prof. Pietro Ciancaglini da FFCLRP-USP. Uma vez que as características estruturais dos complexos forem determinadas, também pretendemos avaliar a atividade permeabilizante em membranas da St II e associada ao DNA utilizando vesículas unilamelares gigantes (GUVs) como membranas modelo observadas por microscopia ótica (IFUSP). A interação de St II e seu complexo com membranas faz parte do projeto de doutoramento de Raffaela de Rosa (bolsista FAPESP, orientação R. Itri) com beneficio direto da visita da profa.Lanio. (AU)
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