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Células-tronco mesenquimais e osteoblastos: avaliação das assinaturas moleculares e do potencial para regenerar tecido ósseo

Processo: 15/21439-6
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de junho de 2016 - 31 de maio de 2018
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
Pesquisador responsável:Adalberto Luiz Rosa
Beneficiário:Adalberto Luiz Rosa
Instituição-sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Pesq. associados:José César Rosa ; Karina Fittipaldi Bombonato Prado ; Márcio Mateus Beloti ; Paulo Tambasco de Oliveira
Assunto(s):Células-tronco mesenquimais  Genômica  Osso e ossos  Proteômica  Osteoblastos  Terapia baseada em transplante de células e tecidos 

Resumo

O osso é um tecido com grande capacidade de regeneração, mas em algumas situações a extensão da injúria impede o reparo do tecido. Nesse cenário, a terapia celular tem atraído a atenção de diversos grupos de pesquisa por ser uma alternativa promissora em relação aos tratamentos existentes. No entanto, diversos aspectos moleculares, celulares e teciduais, ainda não abordados na literatura, necessitam ser investigados para tornar essa terapia um tratamento efetivo para a regeneração de defeitos ósseos. Sendo assim, os objetivos desse estudo são comparar as assinaturas moleculares e o potencial para regenerar o tecido ósseo de células-tronco mesenquimais (CTMs) e de osteoblastos. Para isso, CTMs serão obtidas de medula óssea (CTMs-MO) e de tecido adiposo (CTMs-TA) de ratos, expandidas in vitro e mantidas com características de CTMs ou diferenciadas em osteoblastos (OBs-MO e OBs-TA, respectivamente). As CTMs serão identificadas por imunofenotipagem por citometria de fluxo para os marcadores CD29, CD31, CD34, CD45, CD90 e CD106. A diferenciação osteoblástica será confirmada por avaliação da expressão gênica de Runx2, fosfatase alcalina e osteocalcina por PCR em tempo real. As assinaturas moleculares de CTMs-MO, CTMs-TA, OBs-MO e OBs-TA serão avaliada por análises em larga escala das expressões gênica (microarray) e proteica (proteômica). Para a regeneração do tecido ósseo, as células serão injetadas (injeção única x injeções repetidas) diretamente em defeitos criados em calvárias de ratos duas semanas antes da primeira injeção para mimetizar defeito ósseo sem capacidade de auto-regeneração. Inicialmente, o tempo de permanência de CTMs-MO, CTMs-TA, OBs-MO e OBs-TA nos defeitos ósseos será avaliado por bioluminescência utilizando a injeção de células transfectadas com luciferase. Dessa forma, será possível determinar o intervalo entre as injeções repetidas. Duas semanas após a criação dos defeitos ósseos, será realizada a primeira injeção de células e as injeções adicionais serão aplicadas no intervalo determinado no experimento anterior. Defeitos ósseos tratados com uma única injeção de células e com o veículo utilizado (solução salina tamponada com fosfato) sem células serão também avaliados. Seis semanas após a primeira injeção, os animais serão mortos e o tecido ósseo neoformado será avaliado por microtomografia computadorizada, análise histológica, PCR em tempo real e análise do módulo de elasticidade e da dureza. Os dados serão submetidos ao teste de aderência à curva normal para determinar o teste estatístico adequado. Os resultados desse estudo poderão estabelecer novos parâmetros com relação às características de células candidatas ao uso em terapia celular e à injeção de células para regenerar tecido ósseo, visto que, até o momento, não há na literatura estudos avaliando o efeito de injeções repetidas. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FREITAS, GILEADE P.; LOPES, HELENA B.; SOUZA, ALANN T. P.; OLIVEIRA, PAULA G. F. P.; ALMEIDA, ADRIANA L. G.; SOUZA, LUCAS E. B.; COELHO, PAULO G.; BELOTI, MARCIO M.; ROSA, ADALBERTO L. Cell Therapy: Effect of Locally Injected Mesenchymal Stromal Cells Derived from Bone Marrow or Adipose Tissue on Bone Regeneration of Rat Calvarial Defects. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, SEP 17 2019. Citações Web of Science: 0.
MOURA FIDELES, SIMONE ORTIZ; ORTIZ, ADRIANA CASSIA; ASSIS, AMANDA FREIRE; DUARTE, MAX JORDAN; OLIVEIRA, FABIOLA SINGARETTI; PASSOS, GERALDO ALEIXO; BELOTI, MARCIO MATEUS; ROSA, ADALBERTO LUIZ. Effect of cell source and osteoblast differentiation on gene expression profiles of mesenchymal stem cells derived from bone marrow or adipose tissue. Journal of Cellular Biochemistry, v. 120, n. 7, p. 11842-11852, JUL 2019. Citações Web of Science: 0.
ADRIANA LUISA GONCALVES ALMEIDA; GILEADE PEREIRA FREITAS; HELENA BACHA LOPES; ROSSANO GIMENES; SELMA SIESSERE; LUIZ GUSTAVO SOUSA; MARCIO MATEUS BELOTI; ADALBERTO LUIZ ROSA. Effect of stem cells combined with a polymer/ceramic membrane on osteoporotic bone repair. Brazilian Oral Research, v. 33, p. -, 2019.
PORTILHO SOUZA, ALANN THAFFARELL; FREITAS, GILEADE PEREIRA; LOPES, HELENA BACHA; FERRAZ, EMANUELA PRADO; OLIVEIRA, FABIOLA SINGARETTI; BELOTI, MARCIO MATEUS; ROSA, ADALBERTO LUIZ. Effect of cell therapy with allogeneic osteoblasts on bone repair of rat calvaria defects. CYTOTHERAPY, v. 20, n. 10, p. 1267-1277, OCT 2018. Citações Web of Science: 1.

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