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Estudo do perfil de N-glicosilação e dos sítios de ocupação em várias preparações de tireotropina humana (hTSH) hipofisária e recombinante

Processo: 15/26058-0
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de agosto de 2016 - 31 de julho de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Carlos Roberto Jorge Soares
Beneficiário:Carlos Roberto Jorge Soares
Instituição-sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Pesq. associados:Cibele Nunes Peroni ; João Ezequiel de Oliveira ; Maria Teresa de Carvalho Pinto Ribela ; Miriam Fussae Suzuki ; Paolo Bartolini ; Renata Damiani
Assunto(s):Proteínas recombinantes  Glicosilação  Metabolismo dos carboidratos  Tireotropina 

Resumo

A grande maioria das proteínas recombinantes de interesse farmacêutico é glicosilada e possui, portanto, um ou mais sítios de potencial glicosilação, nem sempre todos ocupados. A importância da fração de carboidrato de uma glicoproteína já é amplamente conhecida, estando diretamente ligada à solubilidade, estabilidade, enovelamento, assemblagem, meia vida circulatória, e atividade biológica in vivo. Somente recentemente, porém, está sendo considerada a importância da micro e macro-estrutura dos carboidratos, que se identificam especialmente com o perfil das glicoformas e suas variações (glycoprofiling) e com a ocupância, ou seja, a fração de sítios potenciais efetivamente glicosilados. Estes parâmetros, raramente determinados, estão diretamente relacionados com o tráfego intracelular, inflamação, mecanismos de defesa e também com várias doenças entre as quais as síndromes devidas a várias alterações congênitas da glicosilação (CDG). Por estas razões, considerando também a experiência adquirida pelo nosso grupo de pesquisa no estudo das glicoproteínas hormonais em geral e da prolactina e tireotrofina em particular, nos dedicamos à padronização de uma metodologia que permita a simultânea determinação destes dois parâmetros: perfil das glicoformas e porcentagem de ocupância. Isto pode ser realizado, ao nosso ver, com base na análise dos N-glicanos (N-glycoprofiling) e determinação da massa molecular da glicoproteína, ambas realizadas mediante MALDI-TOF. O presente projeto se propõe, portanto, de realizar estas determinações em 6 preparações de hTSH de origens diferentes, duas hipofisárias e quatro recombinantes, considerando que os resultados obtidos serão extremamente interessantes seja para a validação da metodologia em si que para o estudo das diferenças existentes entre o produto nativo, secretado pela hipófise humana, e os recombinantes derivados de células humanas HEK 293 ou de CHO. Ressaltamos que o produto derivado de células CHO é atualmente em uso como biofármaco para o diagnóstico e a terapia do câncer da tireóide. Será também realizada uma identificação relativa à ocupância e aos tipos de N-glicanos presentes em cada um dos três sítios de glicosilação em uma preparação hipofisária e duas recombinantes. Isto poderá abrir novas perspectivas relativas ao estudo destas estruturas. (AU)

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SILVA, FELIPE D.; OLIVEIRA, JOAO E.; FREIRE, RENAN P.; SUZUKI, MIRIAM F.; SOARES, CARLOS R.; BARTOLINI, PAOLO. Expression of glycosylated human prolactin in HEK293 cells and related N-glycan composition analysis. AMB EXPRESS, v. 9, n. 1 AUG 29 2019. Citações Web of Science: 0.
DE AZEVEDO, MARIANGELA DE BURGOS M.; MELO, VITOR H. S.; SOARES, CARLOS R. J.; GAMARRA, LIONEL F.; BARROS, CAIO H. N.; TASIC, LJUBICA. Poly(3-hydroxi-butyrate-co-3-hydroxy-valerate) (PHB-HV) microparticles loaded with holmium acetylacetonate as potential contrast agents for magnetic resonance images. INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE, v. 14, p. 6869-6889, 2019. Citações Web of Science: 0.
SANT'ANA, P. M.; OLIVEIRA, J. E.; LIMA, E. R.; SOARES, C. R. J.; PERONI, C. N.; BARTOLINI, P.; RIBELA, MARIA TERESA C. P. Human thyroid-stimulating hormone synthesis in human embryonic kidney cells and related N-glycoprofiling analysis for carbohydrate composition determination. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 102, n. 3, p. 1215-1228, FEB 2018. Citações Web of Science: 1.
DIAS, PAULO V. S.; ARTHUSO, FERNANDA S.; OLIVEIRA, JOAO E.; SUZUKI, MIRIAM F.; SOUSA, JOSE M.; RIBELA, MARIA TERESA C. P.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R. J. Determination of recombinant Interferon-alpha 2 in E. coil periplasmic extracts by reversed-phase high-performance liquid chromatography. JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B-ANALYTICAL TECHNOLOGIES IN THE BIOMEDICAL AND LIFE SCIENCES, v. 1072, p. 193-198, JAN 1 2018. Citações Web of Science: 0.
RIBELA, MARIA TERESA C. P.; DAMIANI, RENATA; SILVA, FELIPE D.; LIMA, ELIANA R.; OLIVEIRA, JOAO E.; PERONI, CIBELE N.; TORJESEN, PETER A.; SOARES, CARLOS R.; BARTOLINI, PAOLO. N-Glycoprofiling Analysis for Carbohydrate Composition and Site-Occupancy Determination in a Poly-Glycosylated Protein: Human Thyrotropin of Different Origins. INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, v. 18, n. 2 FEB 2017. Citações Web of Science: 2.

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