Papel das Vias de Sinalização de Wnt no Potencial Osteogênico de Superfície de Titânio com Nanotopografia

• Processo: 16/14171-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de janeiro de 2017 - 31 de dezembro de 2018
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
• Pesquisador responsável: Márcio Mateus Beloti
• Beneficiário: Márcio Mateus Beloti
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Adalberto Luiz Rosa ; Paulo Tambasco de Oliveira
• Assunto(s): Transdução de sinais Osteoblastos Osso e ossos Proteínas Wnt Titânio Implantodontia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: nanotopografia de superfície | Osso | osteoblasto | titânio | vias de sinalização | Wnt | Implantodontia

Resumo

A superfície de titânio (Ti) com nanotopografia, obtida por condicionamento com solução de H2SO4/H2O2, tem grande potencial osteogênico por modular vias de sinalização envolvidas na diferenciação osteoblástica, como por exemplo as vias de integrinas e proteínas ósseas morfogenéticas (BMPs). Considerando a participação importante de vias de Wingless-Type mouse mammary tumor vírus [MMTV] Integration Site (Wnt) no processo de osteogênese, nós elaboramos a hipótese de que essas vias estão, ao menos em parte, envolvidas no potencial osteogênico da superfície de Ti com nanotopografia. Para testar essa hipótese, células osteoblásticas da linhagem MC3T3-E1 serão cultivadas sobre discos de Ti com nanotopografia e usinados (controle) e será avaliada a expressão gênica, por PCR em tempo real, de marcadores das vias de Wnt canônica e não-canônica Wnt/Ca2+. A partir dos resultados de expressão gênica, serão selecionados um gene-alvo da via de sinalização de Wnt canônica e um da via não-canônica regulados de forma mais intensa pela superfície de Ti com nanotopografia para a aquisição de agrupados de curtas repetições palindrômicas regularmente interespaçadas (CRISPR-Cas9/gRNA) que serão utilizados para o silenciamento dos dois genes-alvos de interesse. A eficácia do silenciamento dos CRISPR-Cas9/gRNA será avaliada por PCR em tempo real e Western blot para determinar a expressão gênica e proteica, respectivamente, dos dois genes-alvos. Em seguida, células da linhagem MC3T3-E1 serão transduzidas com os CRISPR-Cas9/gRNA relacionados às vias de Wnt canônica e não-canônica Wnt/Ca2+ previamente selecionados, na concentração pré-determinada. As transduções serão feitas da seguinte forma: (1) CRISPR-Cas9/gRNA para a via de Wnt canônica, (2) CRISPR-Cas9/gRNA para a via não-canônica Wnt/Ca2+, (3) CRISPR-Cas9/gRNA para as vias de Wnt canônica e não-canônica Wnt/Ca2+ ou (4) controle (CRISPR-Cas9 sem gRNA). As células transduzidas, e consequentemente com as vias de Wnt canônica e/ou não-canônica silenciadas, serão cultivadas sobre as superfícies de Ti com nanotopografia e controle para a avaliação de: (1) expressão de genes relacionados às vias de sinalização de Wnt canônica e não-canônica e dos marcadores osteoblásticos RUNX2, osterix (OSX), fosfatase alcalina (ALP) e osteocalcina (OC), por PCR em tempo real, (2) expressão proteica de RUNX2, por Western blot, e (3) atividade de ALP. Os dados quantitativos serão obtidos em quintuplicata (n=5) e submetidos ao teste de aderência à curva normal e homegeneidade de variâncias. Caso seja detectada normalidade dos dados, será aplicado o teste-t ou ANOVA (para comparação de 2 grupos e comparações múltiplas, respectivamente) ou se não, o teste Mann Whitney ou Kruskal-Wallis serão aplicados. O nível de significância adotado será de 5%. (AU)

Publicações científicas

(6)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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