Mecanismos envolvidos em resistência a antibióticos: parede de ácidos teicóicos e biofilmes como alvos moleculares

• Processo: 17/18173-0
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de fevereiro de 2018 - 31 de janeiro de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Alessandro Silva Nascimento
• Beneficiário: Alessandro Silva Nascimento
• Instituição-sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis Cristalografia de proteínas Glicosiltransferases

Resumo

O surgimento de cepas bacterianas resistentes a antibióticos representa um risco importante para a saúde humana. Doenças infecciosas representam a terceira causa de morte em todo o mundo, de acordo com a Organização Mundial de Saúde, e dados de vigilância retirados de hospitais nos EUA indicam que cerca de 50% das cepas avaliadas de Staphylococcus aureus encontrados em infecções na corrente sanguínea são resistentes a antibióticos b-lactâmicos. O mesmo relatório demonstrou que cerca de 80% das cepas de Enterococcus faecalis encontrados em infecções de locais cirúrgicos eram resistentes à vancomicina. Esses dados destacam a urgência de uma compreensão mais profunda dos mecanismos utilizados pelas bactérias para a aquisição de resistência aos antibióticos e de uma identificação de novos alvos moleculares para o planejamento de novos candidatos a antibióticos. Nesta proposta, objetivamos investigar a relação estrutura-função de três enzimas anteriormente demonstradas como envolvidas na aquisição de resistência a antibióticos. A primeira enzima é uma UDP-N-acetilglucosamina-2-epimerase (MnaA) de S. aureus, envolvida na interconversão de UDP-N-acetilglicosamina (UDP-GlcNAC) e UDP-N-acetilmanosamina (UDP-ManAc). Estes sacarídeos são utilizados na síntese da parede de ácidos teicóicos (WTA), e quando a enzima é inativada ou suprimida, a concentração inibitória mínima (MIC) para vários antibióticos ²-lactâmicos é reduzida, indicando a sensibilização da cepa. As outras duas enzimas são glicosiltransferases (GTs) de E. faecalis e foram recentemente demonstradas como envolvidas na decoração da matriz do biofilme. A perda de função desses genes, denominados epaI e epaOX, resultou em uma diminuição da formação do biofilme e maior susceptibilidade aos antibióticos. Aqui, propomos uma investigação da dinâmica da abertura/fechamento de MnaA durante a catálise, a fim de identificar o estado estrutural mais provável para a interação com um inibidor. Este objetivo envolve uma avaliação precisa da variação na energia livre associada à abertura da enzima utilizando a abordagem de metadinâmica em simulações de dinâmica molecular. O estado mais provável será utilizado para a triagem de candidatos através do docking de ligantes. Os compostos identificados nesta fase serão adquiridos e testados experimentalmente para caracterizar a ligação e sua capacidade de inibir a atividade enzimática. Os genes para as GTs de E. faecalis serão clonados e utilizados para a expressão heteróloga em E. coli. As enzimas purificadas serão utilizadas em ensaios de cristalização para a determinação da estrutura cristalográfica. As estruturas, uma vez obtidas, serão também utilizadas para a triagem de candidatos inibidores usando o docking de ligantes. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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MINARI, KARINE; DE AZEVEDO, ERIKA CHANG; RODRIGUES KIRALY, VANESSA THOMAZ; HELENO BATISTA, FERNANDA APARECIDA; DE MORAES, FABIO ROGERIO; DE MELO, FERNANDO ALVES; NASCIMENTO, ALESSANDRO SILVA; GAVA, LISANDRA MARQUES; INACIO RAMOS, CARLOS HENRIQUE; BORGES, JULIO CESAR. Thermodynamic analysis of interactions of the Hsp90 with adenosine nucleotides: A comparative perspective. International Journal of Biological Macromolecules, v. 130, p. 125-138, JUN 1 2019. Citações Web of Science: 0.

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