Caracterização fenotípica e molecular de duas linhagens de camundongos mutantes que apresentam alterações motoras e sensoriais como potenciais modelos para estudo de doenças neurológicas

• Processo: 17/21103-3
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de fevereiro de 2018 - 31 de maio de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
• Pesquisador responsável: Claudia Madalena Cabrera Mori
• Beneficiário: Claudia Madalena Cabrera Mori
• Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesq. associados: Enio Mori ; Maria Martha Bernardi ; Sandra Regina Alexandre-Ribeiro ; Silvia Maria Gomes Massironi
• Assunto(s): Modelos animais Doenças neurodegenerativas

Resumo

A análise de mutações em modelos murinos pode revelar novas funções para genes conhecidos, identificar genes subjacentes a doenças humanas ortólogas - nas quais o gene causal ainda não foi identificado-, além de proporcionar a investigação de novos fenótipos biomedicamente relevantes. A mutação espontânea tremor (tr), autossômica recessiva, foi identificada na colônia de camundongos Swiss no Biotério do Departamento de Patologia da FMVZ/USP. Os mutantes apresentaram como principais características fenotípicas tremores, ataxia e convulsões audiogênicas. A mutação foi transferida para a linhagem congênica C57BL/6 por retrocruzamentos (N10), e realizou-se o mapeamento genético com marcadores microssatélites indicando que a mesma encontra-se no cromossomo 14, na região entre 33,21 e 38,21 cM. O gene Egr3, um dos fatores de transcrição da família zinc-finger, envolvidos na inervação e formação do fuso mitótico, foi identificado como possível candidato da mutação. O camundongo mutante recessivo cruza pernas (crup), assim denominado devido à posição dos membros posteriores quando o animal é suspenso pela cauda, originou-se da mutagênese química induzida por ENU. Inicialmente essa mutação foi mapeada por microssatélites no cromossomo 11 e, posteriormente, foi realizado o sequenciamento do exoma, resultando em diversos genes candidatos já confirmados pelo método de Sanger. Foram encontradas mutações exclusivas do crup nos genes Taf15, Car4, Slfn 1 e 9, Apoh e Heatr6. Após análise na literatura da função dos possíveis genes mutados, identificou-se como principal candidato o Taf15, que atua principalmente sobre neurônios motores no sistema nervoso central. Resultados preliminares demonstraram que os mutantes crup e tr apresentaram déficit motor e alterações sensoriais que podem estar associadas a doenças neurodegenerativas. O presente projeto tem como objetivos caracterizar o fenótipo dos camundongos mutantes crup e tr por meio da análise do comportamento, da avaliação da neurogênese e da expressão gênica. Os testes comportamentais serão realizados por observação direta dos animais ordenados por parâmetro avaliado, na seguinte sequência: 1) atividade geral e sistema sensorial, 2) testes psicomotores, 3) avaliação do sistema nervoso central e autônomo. Também será avaliada a coordenação motora na trave elevada, a memória espacial no labirinto em T, a ansiedade no labirinto em cruz elevada e o comportamento tipo depressivo pelos testes de suspensão pela cauda e nado forçado. Além disso, será realizada a avaliação funcional para verificar possíveis alterações na neurogênese, em especial no hipocampo, dos camundongos mutantes pelo teste de proliferação celular in vivo com BrdU (5-bromo-2'-deoxiuridina) e expressão da proteína neuronal nuclear (NeuN), bem com determinar a expressão de RNA mensageiro para os genes Taf15 e Egr3 no SNC. Também será realizado o sequenciamento do gene candidato Egr3, visando sua confirmação com responsável pela mutação tr. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

YAMAMOTO, PEDRO K.; DE SOUZA, TIAGO A.; ANTIORIO, ANA T. F. B.; ZANATTO, DENNIS A.; GARCIA-GOMES, MARIANA DE SOUZA A.; ALEXANDRE-RIBEIRO, SANDRA R.; OLIVEIRA, NICASSIA DE SOUZA; MENCK, CARLOS F. M.; BERNARDI, MARIA M.; MASSIRONI, SILVIA M. G.; et al. Genetic and behavioral characterization of a Kmt2d mouse mutant, a new model for Kabuki Syndrome. GENES BRAIN AND BEHAVIOR, v. 18, n. 8, NOV 2019. (17/21103-3, 16/23659-6, 12/25387-2)

ARANHA GARCIA-GOMES, MARIANA DE SOUZA; ZANATTO, DENNIS ALBERT; GALVIS-ALONSO, ORFA YINETH; MEJIA, JORGE; FONSECA BRASIL ANTIORIO, ANA TADA; YAMAMOTO, PEDRO KENZO; MILLAN OLIVATO, MARCIA CAROLINA; SANDINI, THAISA MEIRA; FLORIO, JORGE CAMILO; LEBRUN, IVO; et al. Behavioral and neurochemical characterization of the spontaneous mutation tremor, a new mouse model of audiogenic seizures. Epilepsy & Behavior, v. 105, APR 2020. (17/21103-3)

ALEMAN-LAPORTE, JILMA; ALVARADO, GILBERT; GARCIA-GOMES, MARIANA S. A.; FONSECA BRASIL ANTIORIO, ANA TADA; ZUNIGA-MONTERO, MARCO; CABRERA MORI, CLAUDIA MADALENA. Quality of Adherence to the ARRIVE Guidelines in the Material and Methods Section in Studies Where Swine Were Used as Surgical Biomodels: A Systematic Review (2013-2018). ANIMALS, v. 9, n. 11, NOV 2019. (17/21103-3)

GARCIA-GOMES, MARIANA S. A.; ZANATTO, DENNIS A.; YAMAMOTO, PEDRO K.; WADT, DANILO; ANTIORIO, ANA T. F. B.; ALEMAN-LAPORTE, JILMA; ALEXANDRE-RIBEIRO, SANDRA R.; MARSON, GUILHERME A.; GUIZZO, CEZAR; MASSIRONI, SILVIA M. G.; et al. A Simple and Fast Battery Test for Phenotypic Characterization of Mice. BIO-PROTOCOL, v. 10, n. 7, APR 5 2020. (17/21103-3)