| Processo: | 05/54275-4 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de outubro de 2005 |
| Data de Término da vigência: | 31 de dezembro de 2008 |
| Área de conhecimento: | Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal |
| Pesquisador responsável: | Helio Jose Montassier |
| Beneficiário: | Aliandra Maura Gibertoni Malaman |
| Instituição Sede: | Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 01/14950-3 - Bronquite infecciosa das galinhas: interações entre variabilidade genética e antigênica em estirpes do vírus da bronquite infecciosa e reflexos sobre a imunidade, o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia, AP.TEM |
| Assunto(s): | Imunogenicidade Clonagem Purificação de proteínas Expressão gênica Expressão de proteínas Vírus da bronquite infecciosa Pichia pastoris Escherichia coli |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Clonagem | Expressao | Imunogenicidade | Purificacao | Virus Da Bronquite Infeccciosa |
Resumo A proposta principal do presente projeto é fazer a clonagem e a expressão do gene da nucleoproteína (N) de duas estirpes do vírus da bronquite infecciosa (VBI), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina e o epítopo V5 na extremidade carboxi - terminal, em 2 sistemas hospedeiros diferentes isto é leveduras da espécie, Picchia pastoris linhagem, GS115 e na bactéria, Escherichia coli linhagem, BL21(DE). Serão avaliados os níveis de expressão da proteína N recombinante em cada um desses sistemas hospedeiros de expressão, bem como serão determinadas as características bioquímicas e imunoquímicas de tais proteínas recombinantes, por meio das técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE-SDS) e Western-Blotting. Uma vez obtidas e caracterizadas, essas proteínas N recombinantes, elas serão purificadas pela técnica de cromatografia de afinidade em níquel-agarose, para então serem utilizadas como antígenos alvo de ensaios indiretos de ELISA, que serão desenvolvidos e aplicados na detecção e mensuração de anticorpos em aves infectadas ou vacinadas com o VBI e, será, também, investigada a atividade imunogênica dessas proteínas recombinantes em galinhas, que depois de imunizadas e re-imunizadas com essas proteínas recombinantes, serão submetidas ao desafio com estirpe virulenta do VBI. (AU) | |
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