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Clonagem e expressão da nucleoproteína do vírus da bronquite infecciosa em sistemas hospedeiros eucarióticos (Pichia pastoris) e procarióticos (Escherichia coli)

Processo: 05/54275-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de outubro de 2005
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2008
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
Pesquisador responsável:Helio Jose Montassier
Beneficiário:Aliandra Maura Gibertoni Malaman
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:01/14950-3 - Bronquite infecciosa das galinhas: interações entre variabilidade genética e antigênica em estirpes do vírus da bronquite infecciosa e reflexos sobre a imunidade, o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia, AP.TEM
Assunto(s):Imunogenicidade   Clonagem   Purificação de proteínas   Expressão gênica   Expressão de proteínas   Vírus da bronquite infecciosa   Pichia pastoris   Escherichia coli

Resumo

A proposta principal do presente projeto é fazer a clonagem e a expressão do gene da nucleoproteína (N) de duas estirpes do vírus da bronquite infecciosa (VBI), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina e o epítopo V5 na extremidade carboxi - terminal, em 2 sistemas hospedeiros diferentes isto é leveduras da espécie, Picchia pastoris linhagem, GS115 e na bactéria, Escherichia coli linhagem, BL21(DE). Serão avaliados os níveis de expressão da proteína N recombinante em cada um desses sistemas hospedeiros de expressão, bem como serão determinadas as características bioquímicas e imunoquímicas de tais proteínas recombinantes, por meio das técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE-SDS) e Western-Blotting. Uma vez obtidas e caracterizadas, essas proteínas N recombinantes, elas serão purificadas pela técnica de cromatografia de afinidade em níquel-agarose, para então serem utilizadas como antígenos alvo de ensaios indiretos de ELISA, que serão desenvolvidos e aplicados na detecção e mensuração de anticorpos em aves infectadas ou vacinadas com o VBI e, será, também, investigada a atividade imunogênica dessas proteínas recombinantes em galinhas, que depois de imunizadas e re-imunizadas com essas proteínas recombinantes, serão submetidas ao desafio com estirpe virulenta do VBI. (AU)

Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
MALAMAN, Aliandra Maura Gibertoni. Clonagem e expressão do gene da nucleoproteína do vírus da bronquite infecciosa em sistemas hospedeiros eucarioto (Pichia pastoris) e procarioto (Escherichia coli). 2009. 129 f. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Jaboticabal.

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