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Analise funcional do gene orc/cdc6 de trypanosoma cruzi.

Processo: 06/51510-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2006
Vigência (Término): 30 de junho de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
Pesquisador responsável:Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
Beneficiário:Patricia Diogo de Melo Godoy
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:05/00154-1 - Identificação das origens e da maquinária de replicação em células de Trypanosoma, AP.JP
Assunto(s):Trypanosoma cruzi   Ciclo celular

Resumo

O T. cruzi, parasita causador da Doença de Chagas, têm sido amplamente estudado. Entretanto, as bases moleculares que [regem a replicação do DNA nuclear ainda são pouco conhecidas. O seqüenciamento do genoma do T. cruzi permitiu identificar genes que codificariam proteínas presentes na maquinaria de replicação. Uma análise do banco de dados de T.cruzi identificou um único gene que codificaria para uma proteína homóloga tanto a Ore quanto à Cdc6 (proteínas presentes no complexo de replicação). A expressão de um único polipeptídio desempenhando tanto a função de Ore - de reconhecer as origens de replicação, quanto à função de Cdc6 - de recrutar o complexo Mcm, já está descrito em Archaea, cujo mecanismo de replicação é semelhante, porém mais simples, do que de eucariontes. O objetivo deste projeto é clonar, expressar, purificar e caracterizar funcionalmente a Orc/Cdc6 de T. cruzi, levando em conta atividades já descritas tanto para Ore quanto para Cdc, tais como ligação e hidrólise de ATP, autofosforilação e a capacidade de ligar-se ao DNA. Além disso, serão gerados anticorpos policlonais anti-Orc/Cdc6 que serão utilizados para identificar e quantificar a expressão da proteína nas diferentes fases do ciclo celular e nas diferentes formas do parasita. Estes anticorpos também serão utilizados para ensaios de imunofluorescência para localização nuclear da maquinaria de replicação. (AU)

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