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Bases moleculares da especificidade pelo substrato em b-glicosidases

Processo: 06/52476-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de outubro de 2006
Vigência (Término): 30 de setembro de 2009
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Sandro Roberto Marana
Beneficiário:Lúcio Mário Ferreira de Mendonça
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):beta-Glicosidases   Mutagênese sítio-dirigida

Resumo

O sítio ativo das beta-glicosidases é dividido em duas porções: o subsítio de ligação do monossacarídeo da extremidade redutora do substrato (glicone) e a região que liga o remanescente do substrato (aglicone), porém o papel destes resíduos na determinação da especificidade pelo substrato nunca foi estudado. Um dos objetivos deste projeto é analisar o papel dos resíduos E190, E194 e K201 na determinação da especificidade pelo substrato em uma beta-glicosidase de Spodoptera frugiperda (Sfbgli50 - AF052729) através do uso de mutagênese sítio-dirigido e experimentos de cinética enzimática. A Sfbgli50 - AF052729 têm um pH ótimo de 6,2, o qual é determinado por uma rede de interações entre E399 (nucleófilo catalítico), E187 (ácido catalítico), R97 e Y331. Modificações nesta rede de interações produzidas através de mutagênese sítio-dirigido alteram o pH ótimo da Sfbgli50. Porém, estas enzimas mutantes têm baixa atividade catalítica, sugerindo que mutações em outros pontos da Sfbgli50 podem ser necessários para combinar modificação do pH ótimo e alta atividade catalítica. A localização destes novos pontos de mutação é dificultada pelo grande número de aminoácidos da Sfbgli50 (509). Deste modo, o segundo objetivo deste projeto é selecionar Sfbgli50 que apresentem pH ótimo alterado a partir de uma biblioteca de mutantes construída a partir de mutagênese in vivo. (AU)

Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
MENDONÇA, Lúcio Mário Ferreira de. Bases moleculares da especificidade pelo substrato em b-glicosidases. 2009. 501 f. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Química São Paulo.

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