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Síntese, purificação e caracterização da prolactina humana glicosilada produzida em células de ovário de hamster chinês

Processo: 06/52973-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2006
Vigência (Término): 31 de julho de 2008
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Carlos Roberto Jorge Soares
Beneficiário:Susana da Rocha Heller
Instituição-sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Glicosilação   Prolactina   Bioensaio

Resumo

A prolactina humana é um dos hormônios mais versáteis em termos de ação biológica, tendo sido documentados mais de 300 efeitos biológicos diferentes relacionados a esse hormônio. Sua ação mais conhecida está relacionada com o estimulo da lactação e a regulação do crescimento e da diferenciação da glândula mamaria. As duas principais isoformas desse hormônio são a prolactina não glicosilada e a prolactina glicosilada. Este projeto tem como principais metas a otimização da síntese e purificação da prolactina humana a partir de células de ovário de hamster chinês modificadas geneticamente e já obtidas em nosso laboratório. Será enfatizada g obtenção da forma glicosilada, avaliando, fatores que influenciam a sua produção, como meio de cultura, concentração de glicose, pH do meio, presença de inibidores de síntese protéica, entre outros. As formas glicosiladas purificadas serão caracterizadas por métodos físico-químicos e biológicos incluindo comparação com o produto natural. Na caracterização biológica serão realizados estudos de potência comparando o bioensaio clássico Nb2 com um outro, recém desenvolvido no laboratório, utilizando células Ba/F3-LLP, ambos baseados na proliferação celular estimulada pela presença de prolactina. Esse projeto faz parte de um Projeto principal intitulado "Desenvolvimento de bioprocesso para produção em larga escala de hormônios recombinantes e seus antagonistas em cultura de células CHO em biorreatores", em colaboração com o Instituto Butantan, (FAPESP Processo nº 05/60826-3) (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
HELLER, S. R.; GOULART, H. RODRIGUES; ARTHUSO, F. S.; OLIVEIRA, T. L.; BARTOLINI, P.; SOARES, C. R. J. Synthesis, purification and characterization of recombinant glycosylated human prolactin (G-hPRL) secreted by cycloheximide-treated CHO cells. Journal of Biotechnology, v. 145, n. 4, p. 334-340, FEB 15 2010. Citações Web of Science: 6.
GOULART, HERBERT RODRIGUES; ARTHUSO, FERNANDA DOS SANTOS; NUCCI CAPONE, MARCOS VINICIUS; DE OLIVEIRA, TAIS LIMA; BARTOLINI, PAOLO; JORGE SOARES, CARLOS ROBERTO. Enhancement of Human Prolactin Synthesis by Sodium Butyrate Addition to Serum-Free CHO Cell Culture. JOURNAL OF BIOMEDICINE AND BIOTECHNOLOGY, 2010. Citações Web of Science: 7.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
HELLER, Susana da Rocha. Utilizacao de celulas CHO cultivadas na presenca de cicloheximida para obtencao e caracterizacao de prolactina humana glicosilada (G-hPRL) recombinante. 2008. Dissertação de Mestrado - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP São Paulo.

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