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Estudos funcionais e estruturais de proteínas envolvidas com a regulação da expressão do sistema de secreção Tipo III de Xanthomonas axonopodis patovar citri

Processo: 06/56494-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de novembro de 2006
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2007
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Shaker Chuck Farah
Beneficiário:Julio Henrique Kravcuks Rozenfeld
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:05/59243-3 - Análise estrutural e funcional de sistemas multiprotéticos para a patogenicidade de Xanthomonas axonopodis pv. citri, AP.TEM
Assunto(s):Cristalografia de proteínas   Xanthomonas

Resumo

O Sistema de Secreção Tipo III é capaz de translocar macromoléculas de células bacterianas para células hospedeiras e em Xanthomonas spp. está envolvido com patogenicidade. Esse sistema é codificado pelo lócus hrp, cuja expressão é regulada pela proteína HrpG, um fator de transcrição da família de OmpR. Porém, a estrutura e o mecanismo de regulação da HrpG são desconhecidos. Em Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) identificamos interações de HrpG (XAC1265) com outras duas outras proteínas: XAC0095 e XAC3683. Os objetivos deste trabalho são: 1) investigar o papel das interações de HrpG com XAC3683 e XAC0095 (ou seus homólogos) no controle da expressão dos genes hrp de Xanthomonas axonopodis pv. citri; e 2) determinar a estrutura de HrpG, XAC3683 e XAC0095 de Xanthomonas axonopodis pv. citri. Esses objetivos serão alcançados através da realização de ensaios de "Far Western", "Pull.down", fluorescência e dicroísmo circular, produção "knock-outs" de XAC0095 e XAC3683 para avaliar suas contribuições à expressão do T3SS em Xac e realização de ensaios de cristalização de HrpG ou de seus domínios e mutantes, XAC3683 ou seus domínios e XAC0095 ou seus homólogos (XAC0095b e XAC0095c). Também serão feitas tentativas de cristalizar os complexos HrpG-XAC0095 HrpG-XAC3683 e possivelmente o complexo HrpG-XAC0095-XAC3683. (AU)