Avaliação de métodos de extração de DNA de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de humanos e bovinos e comparação da PCR com método coproparasitológico de centrífugo flutuação em solução de sacarose

• Processo: 06/58352-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2007
• Data de Término da vigência: 22 de setembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária
• Pesquisador responsável: Rodrigo Martins Soares
• Beneficiário: Mikaela Renata Funada
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Cryptosporidium Oocistos Técnicas de diagnóstico animal Extração de DNA Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cryptosporidium Spp | Diagnostico | Extracao De Dna | Pcr

Resumo

Cryptosporidium spp. é considerado um patógeno emergente responsável por infecções em humanos e em uma grande variedade de animais. Muitos aspectos da epidemiologia da infecção e da taxomonia do parasito permanecem desconhecidos. A caracterização molecular de Cryptosporidium spp. com o emprego de técnicas baseadas na PCR tem auxiliado no esclarecimento dessas questões. Entre os problemas freqüentemente relacionados aos métodos moleculares para detecção de Cryptosporidium destacam-se a dificuldade dos mesmos em romper os oocistos do parasito para a exposição dos ácidos nucléicos, bem como a presença de inibidores de polimerização nas amostras fecais que freqüentemente constituem se impedientes para o funcionamento adequado da PCR. Nesse sentido, justifica-se o presente projeto cujo objetivo é avaliar pela PCR e nested PCR o desempenho de diferentes métodos de extração de DNA de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de humanos e bovinos. Os quatros procedimentos de extração de DNA analisados envolvem os métodos de indução de excitamento ou choque térmico para liberação dos esporozoitos; e o uso de fenol-clorofórmio ou sílica para purificação do DNA, testados em diferentes combinações. Paralelamente, o desempenho da PCR empregando-se o melhor método de extração de DNA que se obter será testado em amostras fecais de animais naturalmente infectados, utilizando como parâmetro o teste de centrifugo-flutuação em solução de sacarose. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

FUNADA, Mikaela Renata. Avaliação de métodos de extração de DNA de Cryptosporidium spp. em amostras fecais e comparação de nested PCR com o médodo coproparasitológico de centrífugo-flutuação em sacarose. 2009. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ/SBD) São Paulo.