Análise do controle da quinase S6K sobre a expressão gênica e de sua regulação por A4 via PP2Ac

• Processo: 06/60556-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2007
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nilson Ivo Tonin Zanchin
• Beneficiário: Carlos Roberto Koscky Paier
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos Proteínas quinases Fosfoproteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dna Microarray | Inibidores De S6K1 | Proteina A4 | Proteina Fodfatase | Proteina Quinase S6K

Resumo

A proteína quinase S6K, isoforma 1, é uma fosfoproteína implicada na expressão de genes relacionados ao controle da tradução. Sua ativação por fosforilação envolve a via de sinalização de PI3K e a subseqüente via de sinalização sensível à rapamicina (via de mTOR). É desfosforilada e desativada por PP2AC, que também é regulada por mTOR e interage com a proteína regulatória α4 e com a própria S6K1 simultaneamente. No entanto, a regulação de S6K1 por α4, via PP2AC, não é completamente compreendida. Além disso, a função dessa quinase como reguladora da expressão dos genes da tradução tem sido questionada. Portanto, o objetivo deste projeto é a análise da função de S6K1 no controle pós-transcricional da expressão gênica e da sua regulação por α4/ PP2AC (isoforma a). Para tanto, inibidores de quinases comercialmente disponíveis serão triados para a escolha do mais eficiente, por meio de ensaios enzimáticos padronizados especificamente para S6K1. Esta quinase será expressa em modelo heterólogo e submetida a testes de atividade in vitro na presença de α4, PP2ACα e TIPRL (proteína regulatória que interage com α4) Testes com extratos provenientes de células de mamíferos com níveis alterados de expressão de α4 também serão realizados. Células deficientes na atividade de S6K1, por ação de inibidor específico e expressão alterada de α4, serão submetidas à análise global da expressão gênica por meio do sistema de DNA Microarray. (AU)