Estudos bioquímicos de um inibidor de serinoproteases do tipo kakal presente em glândulas salivares do mosquito Aedes aegypti

• Processo: 07/56614-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Aparecida Sadae Tanaka
• Beneficiário: Renata Midori Okuta Watanabe
• Instituição Sede: Instituto Nacional de Farmacologia (INFAR). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 05/03514-9 - Estudos da função fisiológica e potencial biotecnológico de inibidores de proteases e anti-hemostáticos presentes em artrópodes hematófagos, AP.TEM
• Assunto(s): Anticoagulantes Aedes aegypti
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aedes Aegytpi | Anticoagulantes | Inibidor De Protease

Resumo

O mosquito Ae. aegypti é o vetor clássico da febre amarela e do dengue. Em dípteras hematófagas, a digestão do sangue é realizada por enzimas proteolíticas, que também podem estar envolvidas na relação parasita-vetor. Inibidores de proteases previnem a ativação descontrolada e prematura das enzimas e estão envolvidos no controle de diversos processos fisiológicos. Com a finalidade de conhecer melhor sobre a biologia do vetor do dengue, o objetivo deste trabalho será a expressão e a caracterização de um inibidor de serinoproteases do tipo Kazal presente em glândulas salivares do mosquito Ae. aegypti. Para isso, serão construídos oligonucleotídeos baseados na seqüência de nucleotídeos depositada no banco de dados sob o número de acesso DQ 440176, o fragmento de DNA amplificado por PCR será clonado em vetor de expressão pPIC9 e a proteína recombinante será expressa em levedura Picha pastoris. A proteína recombinante será posteriormente purificada e caracterizada cineticamente sobre diferentes serinoproteases. Paralelamente, avaliaremos o provável papel desta proteína no controle da coagulação sangüínea, visto a sua expressão em glândulas salivares do mosquito. Assim como, avaliaremos o perfil de transcrição desde gene em diferentes tecidos de fêmeas em diferentes tempos após a alimentação com sangue, e análise da presença da proteína nativa em diferentes tecidos utilizando anticorpos policlonais, que serão produzidos neste trabalho, por western blotting. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

WATANABE, RENATA M. O.; SOARES, TATIANE S.; MORAIS-ZANI, KAREN; TANAKA-AZEVEDO, ANITA M.; MACIEL, CERES; CAPURRO, MARGARETH L.; TORQUATO, RICARDO J. S.; TANAKA, APARECIDA S.. A novel trypsin Kazal-type inhibitor from Aedes aegypti with thrombin coagulant inhibitory activity. Biochimie, v. 92, n. 8, p. 933-939, AUG 2010. (05/03514-9, 07/56614-6)

WATANABE, RENATA M. O.; TANAKA-AZEVEDO, ANITA M.; ARAUJO, MARIANA S.; JULIANO, MARIA A.; TANAKA, APARECIDA S.. Characterization of thrombin inhibitory mechanism of rAaTI, a Kazal-type inhibitor from Aedes aegypti with anticoagulant activity. Biochimie, v. 93, n. 3, p. 618-623, 2011. (05/03514-9, 07/56614-6)