| Processo: | 07/57806-6 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de agosto de 2008 |
| Data de Término da vigência: | 30 de junho de 2011 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Vegetal |
| Pesquisador responsável: | Márcio de Castro Silva Filho |
| Beneficiário: | Ricardo Augusto de Oliveira Rodrigues |
| Instituição Sede: | Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Arabidopsis thaliana Cloroplastos vegetais |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Arabidopisis Thaliana | Cloroplastos | Ftsh | Tat | Transporte De Proteinas |
Resumo O transporte de proteínas é um mecanismo essencial para o funcionamento dos seres vivos. Em eucariotos, na maior parte dos casos este processo é específico para cada compartimento subcelular e envolve uma complexa maquinaria de importação, incluindo receptores específicos, chaperonas é seqüências de sinalização distintas. O cloroplasto é uma organela interessante para os estudos de importação de proteínas, pois além de possuir uma limitada capacidade de codificar proteínas, importa do citossol cerca de 90% da totalidade de suas proteínas. Além disso, possui um intrincado sistema de transporte intraorganelar de proteínas. Dentre os diversos mecanismos de transporte de proteínas destinadas à membrana do tilacóide, a via TAT (Twin-Arginine Translocation pathway) de transporte é uma das mais estudadas, principalmente por ser encontrada em bactérias. Dentre os substratos protéicos que utilizam a via TAT, encontram-se as proteínas pertencentes à família das FtsHs. Recentemente foi mostrado que as FtsHs cloro plásticas podem ser agrupadas em três clados distintos e que provavelmente estão associados ao mecanismo de transporte às membranas dos tilacóides (Borgonove et al., em preparação). Estas observações abriram novas possibilidades para a compreensão dos mecanismos de transporte protéico no cloroplasto, notadamente no que se refere à via Tat. Este projeto visa analisar em detalhes o mecanismo de transporte protéico das FtsHs à membrana do tilacóide. Para tal, os objetivos deste projeto são: 1. Caracterizar a via de translocação subcelular das FtsHs 7 e 9, de Arabidopsis thaliana, através de fusões com o gene repórter GFP e expressão estável em A. thaliana e Nicotiana tabacum. Isso será feito através da imunodetecção da GFP em frações dos cloroplastos (estroma e membrana dos tilacóides); 2. Determinar a localização subcelular das FtsHs 7 e 9, através da localização do gene repórter GFP via microscopia óptica confocal; 3. Utilizar a técnica de duplo-híbrido de leveduras para verificar a existência de proteína(s) que interaja(m) com a FtsH5, sugerindo uma variação no mecanismo Tat; 4. Realizar a importação in vitro das FtsHs dos três grupos, a fim de aprofundar o conhecimento dos mecanismos responsáveis pela localização da proteína no interior da organela. (AU) | |
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