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Genes de glândulas salivares do carrapato do boi, Rhipicephalus microplus, afetados pela resposta imune do hospedeiro: clonagem e expressão para avaliação do potencial como antígeno vacinal

Processo: 07/59357-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2008
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2012
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
Pesquisador responsável:Isabel Kinney Ferreira de Miranda Santos
Beneficiário:Sandra Regina Costa Maruyama
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Expressão de proteínas   Imunização

Resumo

Rhipicephalus (Boophilus) microplus, o carrapato dos bovinos, causa enormes prejuízos à saúde e produção animal. Um estudo bioinformática comparativo dos transcriptomas de glândulas salivares e larvas não alimentadas de R. microplus, obtidos a partir de diferentes situações fisiológicas, revelou genes importantes para a hematofagia, cuja expressão gênica foi afetada pela resposta imune do hospedeiro, portanto, úteis para comporem uma vacina anti-carrapato. A hipótese de trabalho é a de que genes expressos diferencialmente em situações de parasitismo distintas e o padrão de reconhecimento dos produtos destes genes pelos hospedeiros (não reconhecimento pelo hospedeiro suscetível e reconhecimento pelo resistente) podem constituir bons candidatos para compor uma vacina anti-carrapato. Objetivos: 1) confirmar a expressão gênica diferencial dos genes de interesse; 2) clonar e expressar esses genes; 3) avaliar o reconhecimento das proteínas recombinantes (recPs) pelo soro dos hospedeiros; 4) caracterizar a atividade das recPs para elucidar seus papéis na resposta imune do hospedeiro e 5) imunizar de bovinos com as recPs e avaliar proteção através de desafio com R. microplus. Metodologia: RT-PCR quantitativo será utilizado para confirmar a expressão diferencial dos genes alvos. A clonagem e expressão de proteínas serão realizadas em sistema procarioto (E. coli) e eucarioto (levedura), utilizando os vetores pET17b e pYGEX, respectivamente. Western blots de proteínas recombinantes serão realizados para avaliação do reconhecimento pelo soro de hospedeiros infestados. Ensaios in vitro de proliferação celular, migração celular, atividade anti-complemento e atividade anti-hemostática serão realizados com as recPs. Bovinos serão imunizados com recPs, sendo 3 doses em intervalos de 10 dias, no 30° dia serão desafiados com larvas de R. microplus e os parâmetros biológicos dos carrapatos analisados. Os soros dos animais serão coletados antes de cada dose e Western blots e ELISA com as proteínas recombinantes serão realizados para avaliação de reconhecimento dos antígenos e dosagem de anticorpos. (AU)

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MARUYAMA, SANDRA R.; GARCIA, GUSTAVO R.; TEIXEIRA, FELIPE R.; BRANDAO, LUCINDA G.; ANDERSON, JENNIFER M.; RIBEIRO, JOSE M. C.; VALENZUELA, JESUS G.; HORACKOVA, JANA; VERISSIMO, CECLIA J.; KATIKI, LUCIANA M.; BANIN, TAMY M.; ZANGIROLAMO, AMANDA F.; GARDINASSI, LUIZ G.; FERREIRA, BEATRIZ R.; DE MIRANDA-SANTOS, ISABEL K. F. Mining a differential sialotranscriptome of Rhipicephalus microplus guides antigen discovery to formulate a vaccine that reduces tick infestations. PARASITES & VECTORS, v. 10, APR 26 2017. Citações Web of Science: 6.
GARCIA, GUSTAVO ROCHA; MARUYAMA, SANDRA REGINA; NELSON, KRISTINA T.; CHAVES RIBEIRO, JOSE MARCOS; GARDINASSI, LUIZ GUSTAVO; MENDES MAIA, ANTONIO AUGUSTO; FERREIRA, BEATRIZ ROSSETTI; KOOYMAN, FRANS N. J.; DE MIRANDA SANTOS, ISABEL K. F. Immune recognition of salivary proteins from the cattle tick Rhipicephalus microplus differs according to the genotype of the bovine host. PARASITES & VECTORS, v. 10, MAR 14 2017. Citações Web of Science: 2.
MARUYAMA, SANDRA REGINA; CASTRO-JORGE, LUIZA ANTUNES; CHAVES RIBEIRO, JOSE MARCOS; GARDINASSI, LUIZ GUSTAVO; GARCIA, GUSTAVO ROCHA; BRANDAO, LUCINDA GIAMPIETRO; RODRIGUES, ALINE REZENDE; OKADA, MARCOS ITUO; ABRAO, EMILIANA PEREIRA; FERREIRA, BEATRIZ ROSSETTI; LOPES DA FONSECA, BENEDITO ANTONIO; FERREIRA DE MIRANDA-SANTOS, ISABEL KINNEY. Characterisation of divergent flavivirus NS3 and NS5 protein sequences detected in Rhipicephalus microplus ticks from Brazil. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 109, n. 1, p. 38+, FEB 2014. Citações Web of Science: 19.
RIBEIRO, JOSE MARCOS C.; LABRUNA, MARCELO B.; MANS, BEN J.; MARUYAMA, SANDRA REGINA; FRANCISCHETTI, IVO M. B.; BARIZON, GUSTAVO CANAVACI; DE MIRANDA SANTOS, ISABEL K. F. The sialotranscriptome of Antricola delacruzi female ticks is compatible with non-hematophagous behavior and an alternative source of food. Insect Biochemistry and Molecular Biology, v. 42, n. 5, p. 332-342, MAY 2012. Citações Web of Science: 27.
MARUYAMA, SANDRA R.; ANATRIELLO, ELEN; ANDERSON, JENNIFER M.; RIBEIRO, JOSE M.; BRANDAO, LUCINDA G.; VALENZUELA, JESUS G.; FERREIRA, BEATRIZ R.; GARCIA, GUSTAVO R.; SZABO, MATIAS P. J.; PATEL, SONAL; BISHOP, RICHARD; DE MIRANDA-SANTOS, ISABEL K. F. The expression of genes coding for distinct types of glycine-rich proteins varies according to the biology of three metastriate ticks, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, Rhipicephalus sanguineus and Amblyomma cajennense. BMC Genomics, v. 11, JUN 7 2010. Citações Web of Science: 34.

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