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Vias de sinalização ativadas por rhBMP-2 e rhBMP-7 produzidas em sistema heterólogo no modelo C2C12 de diferenciação osteoblástica: uma abordagem fosfoproteômica

Processo: 08/53974-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de setembro de 2008
Vigência (Término): 31 de outubro de 2012
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Mari Cleide Sogayar
Beneficiário:Erik Halcsik
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:01/10707-7 - Bases moleculares do controle da proliferação celular e origem de neoplasias na era de genômica e proteômica, AP.TEM
Assunto(s):Proteínas recombinantes   Proteínas morfogenéticas ósseas   Tetra-hidrofolato desidrogenase   Osteoblastos

Resumo

Os traumas e fraturas ósseas, principalmente em idosos, representam um grave problema de Saúde Pública, cujos custos anuais somam 19 bilhões de dólares somente nos Estados Unidos, incluindo os tratamentos de recuperação óssea, como a aproximação de extremidades ou do autoenxerto. Além do alto risco inerente associado à cirurgia e à infecção do local, o risco de reincidência da fratura é alto, tornando necessário buscar abordagens mais eficientes e menos onerosas. Uma abordagem altamente promissora é o tratamento com BMP's (Boné Morphogenetic Proteins), que, em testes clínicos e pré-clínicos mostraram ser eficientes na indução de formação óssea ectópica em murinos e humanos, somado à redução do tempo de internação e dos custos e à não-reincidência da fratura. As BMP's atuam em receptores de células mesenquimais presentes no local da fratura, promovendo a ativação de diversos fatores de transcrição relacionados com a osteogênese. Em trabalho recente do nosso grupo, foi possível produzir BMPs 2 e 7 recombinantes (rhBMPs) e demonstrar que estas ativam genes relacionados às cascatas de sinalização de vias Wnt, Wnt/Ca2+, ToII/IL-1 e BMP durante a diferenciação óssea de células C2C12. O objetivo deste projeto é definir as bases moleculares das etapas críticas na diferenciação osteoblástica através da função desempenhada por proteínas fosforiladas durante a indução por rhBMP-2 e 7, empregando-se, para tanto, técnicas de identificação de fosfoproteínas através de géis bidimensionais revelados com corantes fluorescentes específicos e espectrometria de massa. Além disso daremos continuidade à produção de rhBMP-2 e rhBMP-7 em células de mamífero, visando seu uso terapêutico, através da subclonagem dos cDNAs em vetor autóctone, gerado em nosso laboratório, e do uso de células CHO-DG44, que permitem amplificação gênica através do gene DHFR relacionado à resistência múltipla a drogas. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
HALCSIK, ERIK; FORNI, MARIA FERNANDA; FUJITA, ANDRE; VERANO-BRAGA, THIAGO; JENSEN, OLE NORREGAARD; SOGAYAR, MARI CLEIDE. New insights in osteogenic differentiation revealed by mass spectrometric assessment of phosphorylated substrates in murine skin mesenchymal cells. BMC CELL BIOLOGY, v. 14, OCT 22 2013. Citações Web of Science: 9.

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