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Interação entre vias de reparo de DNA e sinalização em resposta a danos através de silenciamento gênico

Processo: 09/50036-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de julho de 2009
Vigência (Término): 30 de abril de 2014
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Carlos Frederico Martins Menck
Beneficiário:Leonardo Carmo de Andrade Lima
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Reparo do DNA   Dano ao DNA   Inativação gênica   RNA interferente pequeno

Resumo

A luz ultravioleta (UV) e alguns agentes químicos promovem grandes distorções na estrutura do DNA, o que compromete mecanismos vitais para a célula. Em resposta, células ativam uma sinalização em resposta a danos no DNA que coordenam a progressão do ciclo celular, vias de reparo de DNA e indução de morte celular. Como estratégia, as células podem remover as lesões, através de vias de reparo de DNA, ou tolerá-las, através de polimerases específicas que transpõem as lesões. Quinases transduzem os sinais que coordenam a resposta celular a esse tipo de agravo. Porém, como estas quinases interagem com as vias de reparo e de tolerância a danos no DNA ainda não são totalmente conhecidas. Neste projeto, estudaremos a interação entre a sinalização em resposta a danos no DNA, mediado pelas quinases ATR e DNA-PK, com a via de reparo de DNA NER e o mecanismo de tolerância a lesões mediado pela polimerase N, através da busca de possíveis efeitos sinergísticos em resposta a agentes UVB e o quimioterápico cisplatina. Para isso, geraremos células com duplas-deficiências nos produtos dos genes XPV, XPC, ATR e DNA-PK, através de interferência por RNA. Com essas células, investigaremos o efeito da depleção dessas proteínas na sensibilidade das células através da quantificação de lesões no DNA, da sobrevivência e morte celular. Além disso, desenvolveremos uma metodologia para silenciamento de 16 genes envolvidos em reparo de DNA, em células deficientes em NER, empregando lentívírus recombinantes expressando shRNA direcionado a esses genes. Desta forma, pretendemos identificar interações entre NER e outras vias de reparo de DNA. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MAGNUSON, BRIAN; VELOSO, ARTUR; KIRKCONNELL, KILLEEN S.; DE ANDRADE LIMA, LEONARDO CARMO; PAULSEN, MICHELLE T.; LJUNGMAN, EMILY A.; BEDI, KARAN; PRASAD, JAYENDRA; WILSON, THOMAS E.; LJUNGMAN, MATS. Identifying transcription start sites and active enhancer elements using BruUV-seq. SCIENTIFIC REPORTS, v. 5, DEC 11 2015. Citações Web of Science: 8.
ANDRADE-LIMA, LEONARDO C.; VELOSO, ARTUR; LJUNGMAN, MATS. Transcription Blockage Leads to New Beginnings. BIOMOLECULES, v. 5, n. 3, p. 1600-1617, SEP 2015. Citações Web of Science: 4.
ANDRADE-LIMA, LEONARDO C.; VELOSO, ARTUR; PAULSEN, MICHELLE T.; MENCK, CARLOS F. M.; LJUNGMAN, MATS. DNA repair and recovery of RNA synthesis following exposure to ultraviolet light are delayed in long genes. Nucleic Acids Research, v. 43, n. 5, p. 2744-2756, MAR 11 2015. Citações Web of Science: 26.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
LIMA, Leonardo Carmo de Andrade. Respostas a danos no DNA envolvidas na recuperação do bloqueio da replicação e transcrição em células humanas.. 2014. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas São Paulo.

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