Investigação da atividade de vias proteolíticas em mutantes de Leishmania superexpressores de miniexon.

• Processo: 07/06443-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Angela Kaysel Cruz
• Beneficiário: Tiago Rodrigues Ferreira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Leishmania Turnover Proteólise Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão gênica | leishmania | miniexon | proteólise | Sl Rna | turnover | Genética Molecular de Leishmania

Resumo

O grupo do Laboratório de Parasitologia Molecular (Angela K. Cruz, USP-RP), utilizando um cosmídeo com cerca de 100 cópias do gene do miniexon gerou transfectantes de L. braziliensis e L. major que superexpressam SL RNA. Ao promover infecções in vivo, o grupo notificou a atenuação da virulência desses mutantes quando comparada à linhagem controle. A seguir foi conduzida uma investigação para compreender os mecanismos moleculares que sustentam as alterações fenotípicas observadas. Foi conduzida uma análise global da expressão gênica comparando nas linhagens mutante e selvagem o perfil diferencial de proteínas e RNAs. As modificações moleculares observadas incluíram a regulação diferencial de proteínas envolvidas nas respostas a estresse, proteólise, metabolismo energético, fosforilação, ciclo celular e controle de proliferação. Para compreender melhor a natureza molecular da atenuação dos mutantes superexpressores de SL RNA é nossa proposta analisar os mecanismos de degradação e controle da meia-vida das proteínas na célula. Para investigar a importância do complexo proteassomo na regulação do padrão de proteínas expressas no mutante, estudaremos o padrão de ubiquitinação por meio de imunodetecção em géis bidimensionais. A proteólise, em vias distintas, será analisada por ensaios com substratos cromogênicos. Por fim, a taxa de turnover de proteínas será o objeto de estudo por meio de ensaios de decaimento de 35S-metionina. Esses objetivos específicos permitirão entender a atividade proteolítica e possíveis alterações nos mutantes superexpressores de miniexon.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

TOLEDO, JULIANO S.; FERREIRA, TIAGO R.; DEFINA, TANIA P. A.; DOSSIN, FERNANDO DE M.; BEATTIE, KENNETH A.; LAMONT, DOUGLAS J.; CLOUTIER, SERGE; PAPADOPOULOU, BARBARA; SCHENKMAN, SERGIO; CRUZ, ANGELA K.. Cell homeostasis in a Leishmania major mutant overexpressing the spliced leader RNA is maintained by an increased proteolytic activity. INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOCHEMISTRY & CELL BIOLOGY, v. 42, n. 10, p. 1661-1671, OCT 2010. (07/06443-0, 03/02366-0)