Investigação de polimorfismos do gene PLAC4 na população brasileira

• Processo: 09/04751-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Vigência (Início): 01 de agosto de 2009
• Vigência (Término): 31 de julho de 2011
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Mario Henrique Burlacchini de Carvalho
• Beneficiário: Renata Moscolini Romão
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Polimorfismo de um único nucleotídeo Síndrome de Down Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: DNA Plasmático | Pcr | PLAC4 mRNA | Sindrome de Down | SNPs | Trissomia do cromossomo 21 | Genética - Medicina Fetal - Obstetrícia

Resumo

Os métodos atualmente disponíveis para a confirmação do diagnóstico pré-natal de aneuploidias cromossômicas são invasivos e apresentam riscos para o feto. A descoberta de DNA e mRNA fetal livre no plasma materno ampliou as possibilidades de desenvolvimento de novas técnicas de diagnóstico pré-natal não-invasivo, já que se trata de material genético do feto de fácil acesso. A análise qualitativa deste material genético livre já está inserida na prática clínica nos casos onde há diferenças entre as seqüências de ácidos nucléicos materno e fetal, como a Sexagem Fetal e a determinação do Rh fetal para grávidas Rh negativas. Nos casos em que não há, a priori, uma diferença genética entre mãe e feto, qualquer tipo de diagnóstico baseado no DNA plasmático torna-se complicado, uma vez que o DNA fetal representa apenas uma pequena parcela (1-3%) do ácido nucléico total obtido do plasma, sendo 97-99% composto de DNA da própria mãe. Pesquisadores chineses desenvolveram uma estratégia engenhosa para evitar esta questão. Em primeiro lugar demonstraram a presença de mRNA placentário no plasma materno. Através de análise de microarranjos, verificaram quais mRNAs apresentavam uma maior expressão na gravidez e que desaparecessem da circulação após o parto. Entre estes, selecionaram aqueles que continham um maior número de polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs). Eles postularam que no caso de gravidez sindrômica, haveria um desbalanço entre os alelos de determinado SNP, causado pela cópia-extra do cromossomo em questão. No estudo, o foco foi no desenvolvimento de uma técnica de diagnóstico da Trissomia do 21 baseada na razão entre os alelos de um marcador polimórfico (SNP - rs8130833), com freqüência alélica de quase 50% na população chinesa, que está localizado no gene PLAC4 do cromossomo 21, expresso pela placenta. Em gestações normais onde o feto é heterozigoto para o SNP, a razão entre os alelos do PLAC4 é 1:1, enquanto que nos casos de trissomia seria de 2:1. Esta técnica apresentou alta sensibilidade e especificidade, mesmo sendo somente aplicável à porção da população que é heterozigota para o polimorfismo em questão. Com a introdução de vários outros marcadores polimórficos similares, é possível cobrir toda e qualquer população estudada, o que torna esta abordagem muito promissora e, no futuro, pode ser a base para os testes quantitativos de diagnóstico pré-natal não-invasivo. O objetivo do presente trabalho é descrever SNPs no gene PLAC4 com taxa de heterozigosidade próxima de 50% na população brasileira, através da extração do DNA, amplificação por PCR e seqüenciamento de amostras de indivíduos da população brasileira não-aparentados.Esta informação permitirá futuramente detectar e quantificar os SNPs mais informativos (maior prevalência de heterozigose) no mRNA livre no plasma materno, por PCR em tempo real, como um teste de screening para a trissomia do 21, podendo inclusive ser ampliado para o diagnóstico de outras aneuploidias cromossômicas, como trissomias dos cromossomos 13 e 18, através da pesquisa de polimorfismos em RNAs específicos da placenta transcritos de genes localizados nestes cromossomos. Isso seria de grande utilidade na pratica clínica, pois diminuiria muito a necessidade da utilização de procedimentos invasivos para se confirmar o diagnóstico das aneuploidias cromossômicas mais freqüentes.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

ROMÃO, Renata Moscolini. Investigação dos polimorfismos do gene PLAC4 na população brasileira. 2012. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD) São Paulo.