Caracterização Funcional da Nucleoproteína e da Fosfoproteína do Vírus Respiratório Sincicial Humano

• Processo: 09/15400-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Armando Morais Ventura
• Beneficiário: Andressa Peres de Oliveira
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Interação de proteínas Imunização Virologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressão de proteínas | Fosfoproteína | imunização | interação de proteínas | Nucleoproteína | Vírus Respiratório Sincicial Humano | Virologia

Resumo

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) pertencente à família Paramyxoviridae é um dos patógenos mais importantes do trato respiratório. Esse vírus causa doença respiratória principalmente em recém-nascidos, bebês, crianças e em pacientes imunocomprometidos, sendo que ainda não foi desenvolvida vacina para prevenção contra sua infecção. As drogas utilizadas contra o HRSV também têm efeitos parciais. O genoma do HRSV possui aproximadamente 15 kb e codifica 11 proteínas. Um resultado obtido anteriormente no laboratório foi a expressão eficiente de duas dessas proteínas em linhagens celulares humanas, a nucleoproteína (N) e da fosfoproteína (P), após a otimização da seqüencia nucleotídica dos genes que as codificam. Isso tem possibilitado investigar as interações entre N e P e delas com proteínas celulares fora do contexto da replicação viral, além de fazer testes de imunização em camundongos. Um dado mais recente do laboratório indica que as proteínas N e P interagem com HSP70, pertencente à família das proteínas de choque térmico que apresenta função de chaperona. O interesse nessas interações deve-se à hipótese de que a proteína P possa ter a função de promover o enovelamento correto da proteína N e estimular sua associação ao RNA viral. Além disso, para N também foram obtidas evidências de interação com outras três proteínas celulares. Neste projeto buscaremos caracterizar essas interações, e obter evidências de que o recrutamento da HSP70 para o sítio de replicação viral dá a característica de chaperona ao complexo. As proteínas N e P também foram expressas em bactérias em fusão com a maltose binding protein de E. coli, de forma solúvel. Com essas proteínas purificadas, vamos buscar a obtenção de dados estruturais, bem como a interação da proteína N com RNA. Também serão feitos testes de imunização em camundongos para avaliar o potencial das proteínas N e P como imunógenos, tanto na forma de vacinas de DNA como de proteínas purificadas. Com essas abordagens, além de contribuir para o entendimento da replicação do HRSV, pretendemos evidenciar novas possibilidades de intervenção antiviral.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

OLIVEIRA, Andressa Peres de. Caracterização da nucleoproteína e da fosfoproteína do vírus respiratório sincicial humano quanto a suas propriedades imunogênicas e de interação com proteínas celulares.. 2013. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.