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Validação da PCR multiplex na detecção e identificação de candida spp. em infecções de corrente sanguínea de pacientes pediátricos gravemente doentes

Processo: 10/02626-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2010
Vigência (Término): 31 de julho de 2012
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
Pesquisador responsável:Gilda Maria Barbaro Del Negro
Beneficiário:Cleison Ledesma Taira
Instituição-sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Candida   Pediatria   Candidemia   Reação em cadeia da polimerase multiplex   Hemocultura

Resumo

As infecções sistêmicas causadas por Candida spp. representam importante causa de morbidade e mortalidade em pacientes pediátricos internados em unidades de cuidados intensivos. O aumento na freqüência destas infecções se deve a fatores como tratamentos prolongados com antimicrobianos de amplo espectro, uso de nutrição parenteral e emulsões lipídicas, ventilação mecânica prolongada, presença de cateteres venosos centrais, quimioterapia, e maior sobrevida de pacientes com doença de base grave. Os métodos convencionais de cultivo apresentam sensibilidade limitada, além de demandar tempo prolongado para a identificação das espécies infectantes. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) requer pequenos volumes de sangue para análise, situação ideal para crianças gravemente enfermas, propiciando diagnóstico rápido e identificação precisa das espécies de Candida. Este estudo tem como objetivo validar a técnica de PCR do tipo multiplex, para identificar sete espécies de Candida em amostras de sangue de pacientes pediátricos com risco de desenvolver candidemias, e verificar o grau de concordância dos resultados com as hemoculturas. Serão analisadas amostras sanguíneas de 30 pacientes recém-nascidos e de 30 pacientes com idade variando de 30 dias até 20 anos incompletos, internados em unidades de cuidados intensivos do Instituto da Criança - HCFMUSP, que apresentarem condições clínicas que elevam o risco de desenvolver candidemia. Como grupo controle, serão incluídas no estudo 30 crianças sem doenças infecciosas, internadas na unidade hospitalar para cirurgias de pequeno porte. Serão determinados os limiares de detecção e especificidade do sistema de amplificação com primers espécie-específicos a serem delineados para o estudo. As amostras de DNA extraídas do sangue dos pacientes serão submetidas às amplificações do tipo multiplex e os produtos amplificados serão analisados por eletroforese em géis de agarose. Nos casos em que os resultados sejam positivos somente pela técnica de PCR multiplex (com hemoculturas negativas), os produtos amplificados serão submetidos ao seqüenciamento automatizado. A concordância entre os resultados obtidos pela PCR e pelas hemoculturas será avaliada pelo teste de McNemar, adotando-se nível de significância de 5%.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
TAIRA, CLEISON LEDESMA; OKAY, THELMA SUELY; DELGADO, ARTUR FIGUEIREDO; JURFEST RIVERO CECCON, MARIA ESTHER; GOTTARDO DE ALMEIDA, MARGARETE TERESA; BARBARO DEL NEGRO, GILDA MARIA. A multiplex nested PCR for the detection and identification of Candida species in blood samples of critically ill paediatric patients. BMC INFECTIOUS DISEASES, v. 14, JUL 21 2014. Citações Web of Science: 22.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
TAIRA, Cleison Ledesma. Validação da PCR multiplex na detecção e identificação de Candida spp. em infecções de corrente sanguínea de pacientes  pediátricos gravemente doentes. 2013. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina São Paulo.

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