Expressão heteróloga e caracterização antigênica da Plgp43 de Paracoccidioides lutzii

• Processo: 10/03193-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Vigência (Início): 01 de agosto de 2010
• Vigência (Término): 31 de julho de 2012
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rosana Puccia
• Beneficiário: Natanael Pinheiro Leitão Júnior
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/05095-6 - Análise de estruturas vesiculares exportadas e de moléculas secretadas pelos fungos patogênicos Paracoccidioides brasiliensis e Cryptococcus neoformans, AP.TEM
• Assunto(s): Micologia médica Expressão gênica Paracoccidioides brasiliensis Paracoccidioides lutzii
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: diagnosis | gp43 | heterolougous expression | Paracoccidioides brasiliensis | Micologia Médica

Resumo

A gp43 é o principal antígeno diagnóstico da paracoccidioidomicose (PCM), que é uma micose sistêmica causada pelo Paracoccidioides brasiliensis. Nosso laboratório dispõe de isoformas recombinantes solúveis da molécula produzidas em Pichia pastoris que são úteis em ensaios diagnósticos de indivíduos infectados com os grupos filogenéticos S1, PS2 e PS3 de P. brasiliensis. O grupo do Pb01-like foi considerado uma nova espécie, denominado P. lutzii. A Plgp43 ortóloga de P. lutzii conserva apenas 80% de identidade com a gp43, além de não apresentar suas principais características: um sítio de glicosilação, epítopo P10 de células T e um sítio de glucanase inativo. Isso pode ter consequências não só no diagnóstico, como na própria interação do fungo com o hospedeiro. O objetivo do projeto é a expressão heteróloga do gene da Plgp43 de Pb01 em bactéria e P. pastoris. A molécula recombinante será utilizada na produção de anticorpos policlonais de coelho; testes com anticorpos monoclonais e policlonais anti-gp43 serão realizado; um grande número de soros de pacientes com PCM da região sudeste e centro-oeste do Brasil serão analisados. Essas análises serão realizadas através de "immunoblot", mas também imunodifusão passiva e "dot blot", caso seja possível obter a proteína solúvel. A molécula recombinante solúvel purificada será comparada com as demais isoformas de gp43 através de dicroísmo circular e quanto à estabilidade por espectroscopia de fluorescência. Em paralelo, serão revisitadas as tentativas de expressão de isoformas de gp43r mutada no sítio de glicosilação utilizando cDNA já disponíveis no laboratório serão retomadas. Adicionalmente, será feita a expressão e purificação da isoforma gp43r3 em larga escala para ensaios visando cristalização e estudos multicêntricos de sua utilidade diagnóstica.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

LEITAO, JR., NATANAEL P.; VALLEJO, MILENE C.; CONCEICAO, PALLOMA M.; CAMARGO, ZOILO P.; HAHN, ROSANE; PUCCIA, ROSANA. Paracoccidioides lutzii Plp43 Is an Active Glucanase with Partial Antigenic Identity with P. brasiliensis gp43. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 8, n. 8, AUG 2014. (06/05095-6, 10/03193-6)