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Caracterização de lipoproteínas de Leptospira interrogans expressas em Escherichia coli

Processo: 10/51115-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de outubro de 2010
Vigência (Término): 30 de junho de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Ana Lucia Tabet Oller Do Nascimento
Beneficiário:Rosane de Oliveira
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Lipoproteínas   Escherichia coli   Leptospira interrogans   Leptospirose   Modelos animais

Resumo

Leptospirose é uma zoonose altamente disseminada causada por espécies patogênicas do gênero Leptospira. Os roedores são os principais reservatórios da doença nos centros urbanos. Anualmente, são relatados a Fundação Nacional de Saúde cerca de 5000 casos, os quais ocorrem como surtos epidêmicos nas épocas de chuva. O desenvolvimento de uma vacina é critico, uma vez que a contenção da proliferação de roedores é pouco viável. Buscando obter proteínas antigênicas e conservadas nos diversos sorovares de Leptospira interrogans, estudos atuais têm buscado caracterizar e identificar as proteínas de superfície capazes de induzir atividade imunogênica no hospedeiro. O estudo e caracterização de proteínas envolvidas na patogenicidade de L. interrogans, como as lipoproteínas, deverão fornecer dados importantes para o conhecimento dos mecanismos de infecção desta bactéria e servir como base para o desenvolvimento futuro de uma vacina contra a Leptospirose. Sendo assim, o presente projeto propõe clonar e expressar 3 proteínas da classe das lipoproteínas. Os genes selecionados, LIC12238, LIC12880 e LIC10258, codificam preditas proteínas expostas e/ou associadas à membrana externa. Estes genes serão clonados em vetor de expressão de E. coli, as proteínas recombinantes serão purificadas e inoculadas em camundongos para obtenção de soros imunes. Estes soros serão utilizados como sonda para avaliar o reconhecimento dos anticorpos por proteínas do extrato total de Leptospira spp. de diferentes sorovares para estudos de conservação. As proteínas presentes em diferentes leptospiras patogênicas serão avaliadas quanto à reatividade com anticorpos em soros de pacientes diagnosticados com a doença. Será estudada a ligação das proteínas recombinantes obtidas com componentes da matriz extracelular; com componentes do sistema complemento humano, tal como o fator H, e com o plasminogênio a fim de avaliarmos o envolvimento dessas proteínas no processo de adesão e colonização dos tecidos do hospedeiro por L. interrogans. A atividade de imunoproteção em modelo animal também será analisada para sabermos se estas proteínas são interessantes para comporem uma nova vacina contra Leptospirose. (AU)